Regulação da expressão das DNA metiltransferases pelas proteínas p53 e Sp1 em carcinoma epidermóide de esôfago / [Regulation of DNA methyltransferase expression by proteins p53 and Sp1 in esophageal squamous cell carcinoma]

RESUMO

O câncer de esôfago (CE) é um tumor altamente frequente e letal, correspondendo ao oitavo lugar em incidência e sexto em letalidade, dentro todos os tipos de tumores. O subtipo histopatológico mais frequente de CE é o carcinoma epidermóide de esôfago (CEE) que corresponde a aproximadamente 80% dos tumores de esôfago. O CEE apresenta uma alta frequência de mutações no gene TP53 que respondem pelas alterações genéticas mais frequentes nesse tumor e parecem contribuir significativamente para a carcinogênese esofágica. A proteína p53 exerce um papel central na resposta a sinais de estresse, e já foi descrito que sua associação com SP1 tem um papel importante na regulação de diversos genes, como p21. Resultados obtidos em nosso grupo sugeriram uma associação entre maior expressão da DNMT3B e a presença de mutação no gene supressor de tumor TP53 em CEE. As DNA Metiltransferases (DNMTs) são enzimas que catalisam a transferência do grupamento metil para citosinas em dinucleotideos CpG, sendo esta a modificação epigenética mais estudada em CEE. A associação entre mutações em TP53 e aumento da expressão das DNMTs sugere um papel de p53 na regulação da expressão dessas enzimas e uma interação entre mecanismos genéticos e epigenéticos envolvidos no desenvolvimento desses tumores. Portanto, este projeto teve por objetivo avaliar a regulação da expressão das DNMTs por p53 e SP1 em CEE. Este trabalho demonstrou, pela análise do perfil de expressão das DNMTs e SP1, de acordo com o status mutacional de TP53, em amostras de CEE provenientes de pacientes do INCA e de pacientes cujos dados foram depositados no banco de dados The Cancer Genome Atlas (TCGA), que tanto DNMT1 quanto SP1 encontram-se superexpressos em amostras de CEE que possuem mutação no gene TP53 e que as expressões desses genes se correlacionam positivamente nas amostras mutadas. Além disso, os experimentos in vitro de modulação da expressão de SP1 e/ou p53, seguidos de análise de expressão gênica, de avaliação da ligação dos fatores de transcrição ao promotor de DNMT1 e da investigação da ativação transcricional desse gene, realizados em linhagens celulares derivadas de CEE (que expressam ou não p53 selvagem, ativa), mostraram que SP1 e p53 participam da regulação transcricional de DNMT1, sendo capazes de se ligar ao promotor do gene que codifica esta enzima e ativar a sua transcrição. SP1 é capaz de se ligar ao promotor de DNMT1 mesmo em condições basais da célula, e p53 somente após a indução de sua expressão. Entretanto, especificidades da interação entre SP1 e p53 na regulação transcricional de DNMT1 podem desencadear efeitos distintos. SP1 é capaz de transativar a expressão das DNMT1 independente da presença de p53. No entanto, o aumento da expressão de SP1, em modelos celulares p53 ativo, foi associado à redução da expressão de p53 e das DNMTs. A proteína p53, por sua vez, pode ativar ou reprimir a expressão de DNMT1, e o efeito da interação desta proteína com seus elementos consenso no promotor desse gene é dependente dos níveis disponíveis de p53 nas células. Por fim, nesse estudo foi observado que a diminuição da expressão das DNMTs foi capaz de levar a uma redução dos níveis de metilação global do DNA. Portanto, esses resultados demonstram que a regulação da expressão das DNMTs por p53 é um indicador da interação entre mecanismos genéticos e epigenéticos atuando na carcinogênese esofágica.