Distribuição das espécies de crípticas de Candida em isolados de corrente sanguínea: identificação e perfil de sensibilidade antifúngica / Distribution of Candida cryptic species in bloodstream isolates: identification and antifungal sensitivity profile

RESUMO

Candidemias caracterizam um grave problema de saúde pública em todo mundo pela alta mortalidade dos casos, onde as espécies apresentam variação epidemiológica e na sensibilidade aos antifúngicos. Objetivou-se demonstrar a frequência de espécies de Candida, enfatizando as espécies crípticas e caracterizar o perfil de sensibilidade antifúngica de cepas em casos de candidemia, internados em hospitais do estado de São Paulo, onde Instituto Adolfo Lutz é o laboratório de referência. As cepas, únicas de cada paciente, foram recebidas de 22 hospitais públicos gerais, filantrópico, escola e especializado em infectologia. A identificação fenotípica para determinação dos complexos deu-se por análise morfológica e bioquímica, por métodos auxanográficos. Para discriminar espécies crípticas aplicaram-se técnicas moleculares das mais simples às complexas, sendo elas PCR, PCR-RFLP, MALDI-TOF e sequenciamento. Os antifúngicos utilizados nos testes de sensibilidade foram fluconazol, voriconazol, caspofungina, micafungina, anidulafungina e anfotericina B. Nos anos de 2017 e 2018, foram estudadas 144 cepas de candidemia com as seguintes espécies crípticas C. parapsilosis sensu stricto (47/144; 32,6%), C. orthopsilosis (4/144; 2,7%), C. metapsilosis (2/144; 1,4%), C. albicans ssss (40/144; 27,8%), C. dubliniensis (2/144, 1,4%), C. glabrata (14/144; 9,7%), C. haemulonii (2/144; 1,4%), C. haemulonii var. vulnera (3/144; 2,1); C. duobushaemulonii (1/144; 0,7%) e C. guilliermondii (2/144; 1,4%). As demais espécies foram C. tropicalis (21/144; 14,6%), C. krusei (4/144; 2,8%), C. pelliculosa (1/144; 0,7%) e C. kefyr (1/144; 0,7%). Para FCZ foram encontradas 3 cepas de C. parapsilosis (3/46; 6,5%; 0,12->64 µg/mL) e em uma de C. tropicalis (1/21; 4,76%; 64 µg/mL) resistentes; observou-se uma cepa non-wild type de C. guilliermondii (1/2; 50%; 64 µg/mL) e altos MICs para 2 cepas de C. haemulonii var. vulnera (2/3; 66,6%; 16-32 µg/mL) e para a única cepa de C. duobushaemulonii (64 µg/mL). Alta taxa de cepas non-wild type ao VCZ (6/14; 42,8%) foi encontrada em C. glabrata. Reafirma-se neste estudo que as espécies do complexo C. haemulonii, consideradas multirresistentes aos antifúngicos, despontam com maior frequência em nosso estado, se comparado aos dados da literatura. De acordo com os resultados obtidos, a identificação por métodos moleculares representou importante estratégia para demonstrar a variedade de espécies causais de candidemias e alertar para necessidade de terapias apropriadas. A determinação de espécies crípticas propensas à resistência pode ter impacto na sobrevida de pacientes por fornecer subsídios para terapia empírica com base no perfil epidemiológico da candidemia em cada hospital, região e país. (AU)

ABSTRACT

Candidemia is a serious public health problem worldwide due to the high mortality of the cases. The species present epidemiological diversity and different profiles of sensitivity to antifungals. The aim is to show the frequency of Candida species, emphasizing the cryptic species and to characterize the antifungal sensitivity profile of strains in cases of candidemia, admitted to hospitals in the state of São Paulo, where Adolfo Lutz Institute is the reference laboratory. The strains, unique to each patient, were received from 22 general public hospitals, philanthropic, sshool, and specialized in infectious diseases. The phenotypic identification to determine the complex was done by morphological and biochemical analysis, using auxanographic methods. To discriminate cryptic species, molecular techniques from the simplest to the most complex were applied, namely PCR, PCR-RFLP, MALDI-TOF, and Sequencing. The antifungals used in the susceptibility tests were fluconazole, voriconazole, caspofungin, micafungin, anidulafungin and amphotericin B. In the years 2017 and 2018, 144 strains of candidemia were studied with the following cryptic species C. parapsilosis sensu stricto ss (47/144; 32.6%), C. orthopsilosis (4/144; 2.7%), C. metapsilosis (2/144; 1.4%), C. albicans ssss (40/144; 27.8%), C. dubliniensis (2/144, 1.4%), C. glabrata (14/144; 9 , 7%), C. haemulonii (2/144; 1.4%), C. haemulonii var. vulnera (3/144; 2.1); C. duobushaemulonii (1/144; 0.7%) and C. guilliermondii (2/144; 1.4%). The other species were C. tropicalis (21/144; 14.6%), C. krusei (4/144; 2.8%), C. pelliculosa (1/144; 0.7%) and C. kefyr (1/144; 0.7%). Resistance to FCZ was found in 3 strains of C. parapsilosis (3/46; 6.5%; 0.12-> 64 µg / mL) and 1 of C. tropicalis (1/21; 4.76%; 64 µg / mL) and non-wild type for a strain of C. guilliermondii (1/2; 50%; 64 µg / mL) and high MICs for 2 C. haemulonii var. vulnera (2/3; 66.6%; 16-32 µg / mL) and in the single strain of C. duobushaemulonii (64 µg / mL). A high rate of non-wild type to VCZ (6/14; 42.8%) was found for C. glabrata. It is reaffirmed in this study that the species of the C. haemulonii complex, considered multiresistant to antifungals, appear more frequently in our state when compared to the literature data. According to the results, the identification by molecular methods becomes an important tool for the construction of surveillance strategies in hospitals. The determination of cryptic species prone to resistance may have an impact on patient survival by providing subsidies for empirical therapy based on the epidemiological profile of candidemia in each hospital, region, and country. (AU)