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In silico and in vitro evaluation of primers for molecular differentiation of Leishmania species / Avaliação in silico e in vitro de iniciadores para a diferenciação molecular de espécies de Leishmania
Trigo, Beatriz Batista; Oliveira-Rovai, Fernanda Muller de; Milanesi, Marco; Ito, Pier Kenji Rauschkolb Katsuda; Utsunomiya, Yuri Tani; Lopes, Flávia Lombardi; Paulan, Silvana de Cássia; Nunes, Cáris Maroni.
  • Trigo, Beatriz Batista; Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Medicina Veterinária. Araçatuba. BR
  • Oliveira-Rovai, Fernanda Muller de; Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Medicina Veterinária. Araçatuba. BR
  • Milanesi, Marco; Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Medicina Veterinária. Araçatuba. BR
  • Ito, Pier Kenji Rauschkolb Katsuda; Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Medicina Veterinária. Araçatuba. BR
  • Utsunomiya, Yuri Tani; Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Medicina Veterinária. Araçatuba. BR
  • Lopes, Flávia Lombardi; Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Medicina Veterinária. Araçatuba. BR
  • Paulan, Silvana de Cássia; Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Medicina Veterinária. Araçatuba. BR
  • Nunes, Cáris Maroni; Universidade Estadual Paulista. Faculdade de Medicina Veterinária. Araçatuba. BR
Rev. bras. parasitol. vet ; 30(1): e022020, 2021. tab
Article in English | LILACS | ID: biblio-1156230
ABSTRACT
Abstract Leishmaniasis is a zoonotic disease caused by over 20 species of protozoan parasites of the genus Leishmania. Infection is commonly spread by sandflies and produces a wide spectrum of clinical signs and symptoms. Therefore, from an epidemiological and therapeutic standpoint, it is important to detect and differentiate Leishmania spp. The objective of this study was to combinate in silico and in vitro strategies to evaluate the analytical specificity of primers previously described in the literature. According to electronic PCR (e-PCR) analysis, 23 out of 141 pairs of primers selected through literature search matched their previously reported analytical specificity. In vitro evaluation of nine of these primer pairs by quantitative PCR (qPCR) confirmed the analytical specificity of five of them at the level of Leishmania spp., L. mexicana complex or Leishmania and Viannia subgenera. Based on these findings, the combination of e-PCR and qPCR is suggested to be a valuable approach to maximize the specificity of new primer pairs for the laboratory diagnosis of infections with Leishmania spp.
RESUMO
Resumo As leishmanioses são zoonoses causadas por mais de 20 espécies de protozoários do gênero Leishmania. As infecções são comumente disseminadas por flebotomíneos e causam um amplo espectro de manifestações clínicas. Portanto, a detecção e diferenciação de espécies de Leishmania são importantes do ponto de vista epidemiológico e terapêutico. O objetivo deste estudo foi combinar estratégias in silico e in vitro para avaliar a especificidade analítica dos primers descritos anteriormente na literatura. De acordo com a PCR eletrônica (e-PCR), 23 dos 141 pares de primers selecionados por meio de pesquisa da literatura estavam de acordo com a especificidade analítica anteriormente relatada. A avaliação in vitro de nove desses pares de primers, por PCR quantitativa (qPCR), confirmou a especificidade analítica de cinco deles ao nível de espécie de Leishmania, do complexo L. mexicana ou dos subgêneros Leishmania e Viannia. Com base nos resultados, sugere-se que a combinação de e-PCR e qPCR é uma abordagem valiosa para a validação e maximização da especificidade de novos pares de primers para o diagnóstico laboratorial de infecções com Leishmania spp.
Subject(s)


Full text: Available Index: LILACS (Americas) Main subject: Psychodidae / Leishmaniasis / Leishmania Type of study: Diagnostic study / Prognostic study Limits: Animals Language: English Journal: Rev. bras. parasitol. vet Journal subject: Veterinary Medicine / Parasitology Year: 2021 Type: Article Affiliation country: Brazil Institution/Affiliation country: Universidade Estadual Paulista/BR

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