Avaliação das mutações nos códons 41 e 45 do gene codificante da betacatenina em pacientes portadores de tumor desmoide esporádico e sua associação com o prognóstico / Evaluation of mutations in codons 41 and 45 of the Beta-Catenin encoding gene in patients with sporadic desmoid tumors and its association with prognosis

RESUMO

O tumor desmoide (TD) é uma proliferação fibroblástica clonal rara, caracterizada por crescimento infiltrativo e tendência à recidiva local, embora incapaz de metastatizar. A maioria desses tumores é esporádica e contém mutações no gene que codifica a proteína betacatenina. Três mutações em dois códons do gene CTNNB1 foram identificadas como mais frequentes. O tratamento cirúrgico dessa doença tem se mostrado um verdadeiro desafio, e a identificação de fatores prognósticos poderia ajudar na caracterização de grupos com maior ou menor risco para desenvolver recidiva local após esse tratamento. O objetivo deste estudo foi avaliar mutações nos códons 41 e 45 do gene CTNNB1 em pacientes portadores de tumores desmoides esporádicos tratados com cirurgia, bem como avaliar a possível influência de variáveis clínicas, demográficas e moleculares na sobrevida livre de recidiva. Materiais e Métodos: Foi conduzido estudo retrospectivo, unicêntrico, transversal. Foram incluídos pacientes com diagnóstico de tumor desmoide submetidos à ressecção cirúrgica, que tinham dados clínicos e material biológico disponíveis. A correlação entre as variáveis qualitativas foi feita pelo teste qui-quadrado ou teste exato de Fisher; a comparação das variáveis quantitativas pelo teste U de Mann-Whitney ou pelo teste de Kruskal-Wallis; a análise de sobrevida livre de recidiva pela técnica de Kaplan-Meier; e os riscos relativos pela técnica de regressão de Cox uni ou multivariada. Resultados: No período de 1980 a 2015, foram identificados 107 pacientes. A maioria era do sexo feminino (58,9%), de etnia branca (78,9%), tinha idade entre 25 e 50 anos (58,9%), com lesões que se localizavam fora das extremidades (63,4%), apresentando tamanho menor que 10 centímetros (76,4%) e todos foram tratados cirurgicamente. O tempo de seguimento médio foi de 134 meses, a taxa global de sobrevida livre de recidiva (SLR) foi de 74,5% em 2 anos, 65,1% em 5 anos, 63,7% em 10 anos e 59,5% em 20 anos. Dos 107 pacientes que possuíam informações clínicas, foram obtidas 71 amostras tumorais para análise molecular que foi realizada utilizando NGS. Destes, 61 pacientes (85,9%) apresentavam alguma mutação nos códons 41 ou 45 do éxon 3 do gene CTNNB1 e 10 espécimes (14,1%) não tinham qualquer mutação nesses códons. Trinta e três (46,5%) pacientes apresentaram mutação T41A 16 (22,5%) S45F, 6 (8,5%) S45P, 5 (7%) T41A e S45F e 1 (1,4%) T41A e S45F, o valor médio da frequência alélica foi de 16,54%. Os pacientes com mutação S45F apresentaram taxa de sobrevida livre de recidiva em dois, cinco e dez anos menor do que os demais pacientes não mutados ou com outro tipo de mutação (26,7% 13,3% e 13,3% versus 78,4%, 68,1% e 65,4%, respectivamente). Na análise multivariada, tipo de mutação (RR = 5,25 IC [ 2,27­12,15]; p < 0,0001) e topografia (RR = 3,15 IC [1,35­ 7,33]; p = 0,008) foram fatores independentes para o risco de recidiva e o modelo prognóstico proposto evidenciou que os pacientes com alto risco (um ou dois fatores) podem apresentar até 8,36 vezes mais risco de recidiva local após o tratamento cirúrgico que os demais pacientes (IC [2,87­24,6]; p = 0,0001). Os resultados do presente estudo permitem concluir que o sequenciamento de segunda geração é um método adequado para detectar as mutações nos pacientes com tumores desmoides, e a mutação S45F esteve associada com maior risco de recidiva local. Em conjunto com outros fatores clínicos, a presença dessa mutação pode identificar um subgrupo de pacientes com elevado risco de recidiva. Esse achado pode auxiliar na indicação de cirurgias extensas e mutilantes, evitando a morbidade para um grupo específico de pacientes. Todavia, tais achados devem ser validados em uma coorte mais ampla de pacientes

ABSTRACT

The desmoid tumor (DT) is a rare (mono)clonal fibroblastic proliferation characterized by infiltrative growth with tendency to local recurrence although unable to metastasize. Most of these tumors are sporadic and contain mutations in the gene encoding Beta-Catenin. Three mutations in two codons of the CTNNB1 gene were identified as being more frequent. Surgical treatment of this disease has been revealed to be a real challenge and the identification of prognostic factors would help in the identification of groups with higher or lower risk to develop local recurrence after this treatment. The objective of this study was to evaluate mutations in codons 41 and 45 of the CTNNB1 gene in patients whose tumors were treated with surgery as well as to assess clinical and demographic variables and correlate them with relapse-free survival. Materials and Methods: a retrospective, unicentric, cross-sectional study was conducted. Patients diagnosed with desmoid tumor who were submitted to surgery, had clinical data and biological material available were included. The correlation between the qualitative variables was made by the chi-square test or Fisher exact test; the quantitative variables comparison by the Mann-Whitney U test or Kruskal-Wallis test; the relapse-free survival by Kaplan-Meier; and relative risks by the univariate or multivariate Cox regression technique. Results: 107 patients were identified from 1980 to 2015. The majority were female (58.9%), white (78.9%) 25-50 years old (58.9%), their lesions were located outside the extremities (63.4%), measured less than 10 centimeters (76.4%) and they were all surgically treated. Mean follow up period was 134 months, overall relapse-free survival rate (RFS) was 74.5% in 2 years, 65.1% in 5 years, 63.7% in 10 years and 59.5% in 20 years. From 107 patients who had clinical information, 71 samples were obtained for molecular analysis. Among these, 61 patients (85.9%) had mutations at codons 41 or 45 of exon 3 of the CTNNB1 gene and 10 specimens (14.1%) had no mutations at these codons. Thirty-three (46.5%) patients had mutation T41A 16 (22.5%) S45F, 6 (8,5%) S45P, 5 (7%) T41A and S45F and 1 (1,4%) T41A and S45F, the mean of allele frequency was 16.54%. Patients with mutation S45F had a relapse-free survival rate of two, five and 10 years smaller than the patients with no mutations or with a different mutation (26.7% 13.3% and 13.3% versus 78.4%, 68.1% and 65.4%, respectively). In the multivariate analysis, type of mutation (RR = 5,5 IC[2.27 ­ 12.15]; p < 0.0001) and topography (RR = 3.15 IC [1.35 ­ 7.33]; p = 0.008) correlated with risk of relapse and the proposed prognostic model demonstrated that high risk patients (one or two factors) may present a greater risk (up to 8.36 times) of local recurrence after surgical treatment than other patients (IC[2.87 ­ 24.6]; p = 0.0001). The results of the present study allow us to conclude that second generation sequencing is a suitable method to detect mutations in patients with desmoid tumors and the S45F mutation has been associated with an increased risk of local recurrence. Combined with other clinical factors, the presence of this mutation may identify a subgroup of patients with a high risk of relapse. This finding may support the indication of extensive and mutilating surgeries, avoiding morbidity for a specific group of patients. Nevertheless, such findings should be validated in a broader cohort of patients