Avaliação da expressão de TollLike Receptors (TLR), e fatores de transcrição MPKp38 e NFBp65 em pacientes com carcinoma escamoso de pênis / Evaluation of expression TollLike Receptors (TLR) and transcription factor p38 and MPK NFκBp65 in patients with squamous cell carcinoma of the penis

RESUMO

Introdução: A modulação do processo inflamatório por TLRs pode ser um fator chave no desenvolvimento e progressão tumoral, induzindo tanto a respostas pró-tumorais, como anti-tumorais, muitas vezes através da regulação da sinalização pela NF-B e subsequente produção de fatores de crescimento e proteínas anti-apoptóticas. A magnitude e duração da ativação dos TLRs são fundamentais para o desenvolvimento de um estado inflamatório pró-tumoral ou resposta anti-tumoral. O conhecimento de suas vias pode influenciar na aplicação clínica dos imunoterápicos como tratamento do carcinoma escamoso de pênis. Consequentemente, decidimos investigar a expressão de receptores TLR e fatores de transcrição em pacientes com câncer de pênis, ainda não descrito na literatura. Objetivos: Avaliar a expressão dos receptores Toll-like 2 e 9, e das vias de sinalização intracelular NF-Bp65 e MAPKp38 no carcinoma escamoso de pênis. Métodos: Foram incluídos um total de 38 pacientes masculinos com câncer de pênis, com idade ≥ 18 anos. Como grupo controle, foram incluídos 15 homens saudáveis. A concentração sérica de proteínas foi determinada pela técnica de citometria de fluxo. Para análises estatísticas, foram utilizados os testes de Mann-Whitney e de correlação de Spearman. Foi considerado significativo p < 0,05. Resultados: Em sangue periférico, houve uma maior quantidade de leucócitos com expressão de TLR2 e MAPKp38 em pacientes, compardo aos controles saudáveis (p=0,002 e p<0,0001, respectivamente), enquanto os leucócitos que expressavam TLR9 e NFkB foram mais numeroso em controles saudáveis (p=0,03 e p=0,03, respectivamente). Em neutrófilos, havia um maior número com expressão de NFBp65 e MAPKp38, em controles (p=0,001 e p<0,0001, respectivamente). Já nos monócitos, havia o maior número de células com expressão de TLR9 e MAPKp38, em pacientes com câncer de pênis (p=0,003 e p=0,01, respectivamente). Nos pacientes com tumores > 3,5 cm, há um maior número de leucócitos totais que expressam TLR9, NFBp65 e MAPKp38 (p=0,01; p=0,008 e p=0,03, respectivamente), uma maior quantidade de neutrófilos com expressão de TLR2 e NFBp65 (p=0,0008 e p=0,01, respectivamente). Já em tumores ≤ 3,5 cm, uma maior quantidade de monócitos expressavam NFBp65 (p=0,02). Não houve diferença em leucócitos totais, na expressão dos receptores ou fatores de transcrição na avaliação de IPN (Invasão perineural), porém em pacientes com IPN+, havia um maior número de monócitos e neutrófilos com expressão de TLR9 (p=0,009 e p=0,0003, respectivamente). No tecido tumoral, houve uma maior expressão de TLR9 e NFBp65 em pacientes com tumores ≤ 3,5cm (p= 0,02). Não foi observado correlação entre níveis de TLR2, TLR9 e NFBp65 entre tecido tumoral e sangue periférico. No tecido tumoral, havia uma correlação positiva moderada entre TLR2 e TLR9 (r=0.65, p=0.0009) e TLR9 e NFBp65 (r=0.60; p=0.003), além de correlação positiva alta entre TLR2 e NFBp65 (r=0.78; p<0.0001). Conclusão: Existem alterações nos níveis sanguíneos de TLR2, TLR9, NFBp65 e MAPKp38, em diferentes níveis, a depender do tipo celular, e em tecido tumoral que podem funcionar como fatores prognósticos e preditivos de tratamento para pacientes com CEC de pênis

ABSTRACT

Introduction: Modulation of the inflammatory process by TLRs may be a key factor in tumor development and progression, inducing both pro-tumor and anti-tumor responses, often through the regulation of NF-κB signaling and subsequent growth factor and anti-apoptotic proteins production. The magnitude and duration of TLR activation are critical for the development of a pro-tumor inflammatory state or anti-tumor response. Knowledge of its pathways may influence the clinical application of immunotherapeutics as a treatment for squamous cell carcinoma of the penis. Consequently, we decided to investigate the expression of TLR receptors and transcription factors in patients with penile cancer, not yet described in the literature. Objectives: To evaluate the expression of Toll-like receptors 2 and 9, and the intracellular signaling pathways NF-κBp65 and MAPKp38 in squamous cell carcinoma of the penis. Methods: A total of 38 male patients with penile cancer, aged ≥ 18 years, were included. As a control group, 15 healthy men were included. Serum protein concentration was determined by the flow cytometry technique. For statistical analysis, the Mann-Whitney tests, and Spearman's correlation were used. It was considered significant p <0.05. Results: In peripheral blood, there were more leukocytes expressing TLR2 and MAPKp38 in patients, compared to healthy controls (p = 0.002 and p <0.0001, respectively), whereas leukocytes expressing TLR9 and NFκB were more numerous in healthy controls (p = 0.03 and p = 0.03, respectively). In neutrophils, there was a greater number with expression of NFκBp65 and MAPKp38, in controls (p = 0.001 and p <0.0001, respectively). In monocytes, there were the highest number of cells expressing TLR9 and MAPKp38 in patients with penile cancer (p = 0.003 and p = 0.01, respectively). In patients with tumors> 3.5 cm, there is a greater number of total leukocytes expressing TLR9, NFκBp65 and MAPKp38 (p = 0.01, p = 0.008 and p = 0.03, respectively), a higher amount of neutrophils with expression of TLR2 and NFκBp65 (p = 0.0008 and p = 0.01, respectively). Already in tumors ≤ 3.5 cm, a higher amount of monocytes expressed NFκBp65 (p = 0.02). There was no difference in total leukocytes, expression of the receptors or transcription factors in the IPN assessment, but in patients with IPN +, there was a higher number of monocytes and neutrophils with TLR9 expression (p = 0.009 and p = 0.0003, respectively) . In tumor tissue, there was a greater expression of TLR9 and NFκBp65 in patients with tumors ≤ 3.5 cm (p = 0.02). No correlation was found between levels of TLR2, TLR9 and NFκBp65 between tumor tissue and peripheral blood. In the tumor tissue, there was a moderate positive correlation between TLR2 and TLR9 (r = 0.65, p = 0.0009) and TLR9 and NFκBp65 (r = 0.60; p = 0.003), and a high positive correlation between TLR2 and NFκBp65 (r = 0.78; p <0.0001). Conclusion: There are changes in blood levels of TLR2, TLR9, NFκBp65 and MAPKp38, at different levels, depending on the cell type, and on tumor tissue that may function as prognostic and predictive factors of treatment for patients with penile SCC