Captação e preservação de disco intervertebral humano em banco de tecidos / Capture and preservation of human intervertebral disc in a tissue bank

RESUMO

Doença degenerativa da coluna vertebral, sobretudo, o acometimento do disco intervertebral, é frequente na população mundial. O tratamento cirúrgico apresenta indicações precisas constituindo o padrão-ouro, a artrodese. Esta modalidade, entretanto, altera a mobilidade e a biomecânica do segmento funcional. A criopreservação de disco intervertebral em banco de tecidos e sua posterior utilização como substituto do disco degenerado objetivam manter a fisiologia local. Propor técnica cirúrgica de ressecção de bloco de coluna lombar e avaliar a possibilidade da manutenção das características histológicas dos discos intervertebrais submetidos ao congelamento com criopreservante. Foram obtidos espécimes de 6 doadores cadáveres humanos após avaliação e autorização de captação de tecido musculoesquelético de acordo com as normas do Sistema Nacional de Transplantes por meio da Portaria nº 2600 de 21 de outubro de 2009 do Ministério da Saúde. Após a realização de uma técnica de ressecção no bloco da coluna lombar, o material foi transportado para o banco de tecidos do Instituto Nacional de Traumatologia e Ortopedia Jamil Haddad em um recipiente específico com soro fisiológico 0,9% à temperatura de 4°C. Cada bloco de coluna lombar gerou, após o processamento do tecido realizado até 8 horas da captação, 3 discos intervertebrais. Dois discos foram armazenados em meio crioprotetor e congelados de forma gradual até -80°C. Cada disco foi descongelado no 7° e 15° dia, seccionados longitudinal e transversalmente e então, confeccionadas lâminas coradas com hematoxilina-eosina para análise histológica; Um disco controle, não-congelado, foi preservado em formol 10% e sofreu o mesmo processo de secção e preparo de lâminas, coloração. O estudo histológico das lâminas observou a presença ou não de alterações morfoestruturais (ânulo fibroso, núcleo pulposo) e celularidade, pontuada e classificada em muito alterada (0-3 pontos), moderadamente alterada (4-7 pontos) e inalterada (8-10 pontos). A técnica cirúrgica de ressecção en bloc da coluna vertebral foi reproduzida em todos os doadores cadáveres. A análise histológica revelou que poucas alterações foram observadas após 7 dias de congelamento do disco em meio criopreservante. Observamos que, embora tecnicamente demandante, a ressecção de bloco de coluna lombar é reprodutível. A preservação das propriedades do disco intervertebral por, no mínimo, 7 dias é possível e torna-se uma possibilidade de material para transplantação em futuras artroplastias biológicas

ABSTRACT

Degenerative disease of the vertebral column, especially the involvement of the intervertebral disc, is frequent in the world population. The surgical treatment presents precise indications constituting the gold standard, the arthrodesis. This modality, however, alters the mobility and biomechanics of the functional segment. The cryopreservation of intervertebral disk in a tissue bank and its posterior use as a substitute for the degenerate disc aim to maintain the local physiology. To propose surgical technique of lumbar spine block resection and to evaluate the possibility of maintaining the histological characteristics of the intervertebral discs submitted to the freezing with cryopreservant. Specimens of 6 human cadaveric donors were obtained after evaluation and authorization of the capture of musculo-skeletal tissue in accordance with the norms of the National System of Transplants through Ordinance No. 2600 of October 21, 2009 of the Ministry of Health. After performing a resection technique in the lumbar spine block, the material was transported to the tissue bank of Jamil Haddad National Institute of Traumatology and Orthopedics in a specific container with 0.9% saline solution at 4 ° C. Each lumbar spine block generated, after processing the tissue performed up to 8 hours of the capture, 3 intervertebral discs. Two discs were stored in cryopreservation and frozen gradually to -80 ° C. Each disc was thawed on day 7 and day 15, sectioned longitudinally and transversely, and then, blades stained with hematoxylin-eosin for histological analysis; One disc control, non-frozen, was preserved in 10% formaldehyde and underwent the same process of sectioning and preparation of blades staining. The histological study of the slides observed the presence or absence of morphostructural alterations (fibrous annulus, nucleus pulposus) and cellularity, scored and classified as highly altered (0-3 points), moderately altered (4-7 points) and unchanged (8-10 points). The surgical technique of en bloc resection of the spine was reproduced in all cadaveric donors. Histological analysis revealed that few changes were observed after 7 days of cryopreservant disk freezing. We observed that, although technically demanding, lumbar spine block resection is reproducible. The preservation of the intervertebral disc properties for at least 7 days is possible and becomes a possibility of material for transplantation in future biological arthroplasties