Culture et caracterisation des cellules endotheliales d'artere coronaire de porc

RESUMEN

Introduction: Les proprietes biologiques de l'endothelium vasculaire lui conferent un role majeur dans le controle de la permeabilite; du tonus vasculaire et l'angiogenese; des fonctions physiologiques cruciales a l'homeostasie vasculaire. La comprehension du ou des mecanisme(s) d'action sous-jacent(s) a ces multiples proprietes a longtemps ete retardee par la difficulte technique d'obtenir des quantites suffisantes de ce tissu permettant de realiser les etudes in vitro. Ce travail a pour objectif de proceder a la mise en culture et a la caracterisation des cellules endotheliales d'artere coronaire de porc. Materiels et Methodes La couche de cellules endotheliales a ete prelevee par passage de la solution de collagenase a travers la lumiere du vaisseau. Les cellules ont ete ensuite ensemencees dans des flacons de culture; prealablement recouverts de collagene de queue de rat dans un milieu de culture RPMI1640/M199 auquel a ete rajoute 15de serum de veau fotal; des antibiotiques et de la fungizone. Les cultures ont ete maintenues a 37oC dans un incubateur. La sonde fluorescente constituee de lipoproteines acetylees de faible densite (Dil-Ac-LDL) a ete utilisee comme marqueur biologique specifique par recapture par les cellules endotheliales. Les cellules confluentes ont ete repiquees dans des chambres de culture LAB-TEK puis examinees au microscope photonique et confocal. Resultats Apres 24 heures de mise en culture; les cellules endotheliales adherent au collagene et forment des rosettes. En se multipliant; elles colonisent peu a peu l'ensemble de la surface de la boite de culture pour former a confluence un tapis pavimenteux relativement homogene. A confluence; la proliferation des cellules endotheliales est inhibee par le contact et elle presente un aspect polygonal. Nos resultats montrent que les cellules cultivees presentent un intense marquage au Dil-Ac-LDL. Conclusion: Les cellules endotheliales de l'artere coronaire de porc en culture constituent un bon outil pour l'etude des fonctions endotheliales dans des conditions physiologiques et pathologiques.Introduction: Les proprietes biologiques de l'endothelium vasculaire lui conferent un role majeur dans le controle de la permeabilite; du tonus vasculaire et l'angiogenese; des fonctions physiologiques cruciales a l'homeostasie vasculaire. La comprehension du ou des mecanisme(s) d'action sous-jacent(s) a ces multiples proprietes a longtemps ete retardee par la difficulte technique d'obtenir des quantites suffisantes de ce tissu permettant de realiser les etudes in vitro. Ce travail a pour objectif de proceder a la mise en culture et a la caracterisation des cellules endotheliales d'artere coronaire de porc. Materiels et Methodes La couche de cellules endotheliales a ete prelevee par passage de la solution de collagenase a travers la lumiere du vaisseau. Les cellules ont ete ensuite ensemencees dans des flacons de culture; prealablement recouverts de collagene de queue de rat dans un milieu de culture RPMI1640/M199 auquel a ete rajoute 15de serum de veau fotal; des antibiotiques et de la fungizone. Les cultures ont ete maintenues a 37oC dans un incubateur. La sonde fluorescente constituee de lipoproteines acetylees de faible densite (Dil-Ac-LDL) a ete utilisee comme marqueur biologique specifique par recapture par les cellules endotheliales. Les cellules confluentes ont ete repiquees dans des chambres de culture LAB-TEK puis examinees au microscope photonique et confocal. Resultats Apres 24 heures de mise en culture; les cellules endotheliales adherent au collagene et forment des rosettes. En se multipliant; elles colonisent peu a peu l'ensemble de la surface de la boite de culture pour former a confluence un tapis pavimenteux relativement homogene. A confluence; la proliferation des cellules endotheliales est inhibee par le contact et elle presente un aspect polygonal. Nos resultats montrent que les cellules cultivees presentent un intense marquage au Dil-Ac-LDL. Conclusion: Les cellules endotheliales de l'artere coronaire de porc en culture constituent un bon outil pour l'etude des fonctions endotheliales dans des conditions physiologiques et pathologiques