A novel activity on thymocytes cells exerted by the rattlesnake (Crotalus durissus cumanensis) venom / Nueva actividad de los timocitos estimulada por el veneno de la serpiente de cascabel (Crotalus durissus cumanensis)

ABSTRACT

Abstract. Introduction: The thymus is active mainly during the neonatal and pre-adolescent periods. Objective: To test naïve thymocytes proliferation and monocytes stimulation. Materials and methods: We collected fresh thymus tissue from neonate mice after surgery. Suspension cells were coated onto Ficoll-Hypaque support. The obtained cells (thymocytes) were cultured measuring the proliferation of naïve T cells stimulated by Crotalus durissus cumanensis (Cdc) venom at sub-lethal doses (20 ng). Then, we supplemented the wells with AlamarBlue™ and incubated them for 5 h to test their proliferation. Mononuclear cells from mice peripheral blood were collected and layered onto the support of the Ficoll-Hypaque solution. We added the thymocytes actively dividing (25 x 105 cells) from cultures stimulated with Cdc venom at 20 ng/well to cultured monocytes freshly obtained from the Ficoll-Hypaque separation. Both cell populations were incubated for 36 h until monocytes matured to macrophages. Results: The naïve thymocytes rapidly proliferated after stimulation with the Cdc venom (NTCdc) and these successively induced the maturation and function of monocytes progenitor cells to mature macrophages, which ingested Chinese ink. Conclusions: The naïve thymocytes proliferated by stimulation with the Cdc venom and subsequently the NT/Cdc induced the rapid maturation and function of monocytes progenitor cells becoming mature macrophages with their phenotypic characteristics.

RESUMEN

Resumen. Introducción. El timo es activo principalmente durante los períodos neonatal y preadolescente. Objetivo. Probar la proliferación de los timocitos tempranos y la estimulación de monocitos que producen. Materiales y métodos. Se recogió tejido de timo fresco después de la cirugía de ratones recién nacidos. La suspensión de células se colocó sobre un soporte de Ficoll-Hypaque. Las células obtenidas (timocitos) se cultivaron y se midió la proliferación de células T vírgenes estimuladas por el veneno de Crotalus durissus cumanensis (Cdc) en dosis subletales (20 ng). A continuación, se agregó AlamarBlue™ a los pocillos y se incubaron durante 5 horas para evaluar la proliferación. Se recogieron células mononucleares de sangre periférica de ratones y se colocaron sobre un soporte de solución de Ficoll-Hypaque. Los timocitos que se dividieron activamente (25 x 105 células) a partir de los cultivos estimulados con veneno de Cdc (20 ng/pocillo) y se agregaron a los cultivos de monocitos recién obtenidos de la separación en la solución de Ficoll-Hypaque. Ambas poblaciones celulares se incubaron durante 36 horas hasta que los monocitos maduraron a macrófagos. Resultados Los timocitos tempranos experimentaron una rápida proliferación estimulada por el veneno de Cdc (NTCdc) y, posteriormente, indujeron la maduración y la función de las células progenitoras de monocitos, los cuales maduraron a macrófagos, que se tiñeron con tinta china. Conclusiones. Los timocitos tempranos proliferaron con la estimulación del veneno de Cdc y, posteriormente, el NT/Cdc indujo la maduración rápida y la función de las células progenitoras de monocitos, transformándose en macrófagos con sus características fenotípicas.