Identificación molecular de los VPH oncogénicos mediante PCR en tiempo real con sondas Taqman / Molecular identification of oncogenic HPVS by real time PCR with Taqman probes

RESUMEN

INTRODUCCIÓN: los Virus del Papiloma Humano (VPH) constituyen un diverso grupo de virus, siendo los genotipos 16 y 18 los más prevalentes y, por lo tanto, principales objetivos de varios estudios en infecciones del tracto anogenital. El presente estudio pretende determinar la infección por VPH de Alto Riesgo en muestras genitales, mediante la aplicación de tecnología molecular para la genotipificación de VPH16 y VPH18 por PCR en Tiempo Real. MATERIALES Y MÉTODOS: se trabajó con 151 muestras de hisopados genitales, las extracciones de ADN se realizaron mediante columnas de sílice y la identificación de los VPH de Alto Riesgo fue mediante la optimización de una PCR en Tiempo Real duplex para la genotipificación de VPH16 y 18, para lo cual se realizó el diseño de cebadores y sondas TaqMan por software especializado, y se determinó las concentraciones de reactivos y temperaturas de reacción ideales. RESULTADOS: en la identificación de los VPH de Alto Riesgo se obtuvo un total de 41 casos positivos, muestras que fueron seleccionadas para realizar la genotipificación de VPH16 y VPH18 mediante la técnica de PCR en Tiempo Real. La mayor presencia de estos virus oncogénicos se determinó en mujeres de 15 a 29 años (40% y 26,7% respectivamente). CONCLUSIÓN: mediante la optimización e implementación de nuevas técnicas moleculares se pretende mejorar el seguimiento epidemiológico sobre la presencia de los VPH de Alto Riesgo y así proporcionar una mejor guía sobre la diseminación y presencia de los distintos genotipos oncogénicos de VPH en nuestra población.

ABSTRACT

INTRODUCTION: Human Papillomavirus (HPV) constitute a diverse group of viruses, being genotypes 16 and 18 the most prevalent and main objectives of several studies on anogenital tract infections. The present study intends to determine the High Risk HPV infection in genital samples, through the application of molecular technology for the genotyping of HPV16 and HPV18 by Real Time PCR. MATERIALS AND METHODS: we worked with 151 samples of genital swabs whereDNA extractions were performed using silica columns and the identification of High Risk HPV was through the optimization of a duplex real-time PCR for genotyping of HPV16 and 18, for which primers and TaqMan probes were designed by specialized software, and ideal reagent concentrations and reaction temperatures were determined. RESULTS: in the identification of HPV High Risk, a total of 41 positive cases were obtained. These samples were selected to perform genotyping of HPV16 and HPV18 using the Real Time PCR technique. The greater presence of these oncogenic viruses was determined in women aged 15 to 29 years (40% and 26.7% respectively). CONCLUSION: through the optimization and implementation of new molecular techniques, it is intended to improve the epidemiological follow-up on the presence of High Risk HPV and thus provide a better guide on the dissemination and presence of the different oncogenic HPV genotypes in our population.