Detoxification of LTA by intracanal medication: analysis by macrophages proinflammatory cytokines production

ABSTRACT

Abstract The aim of this study was to evaluate in vitro the effect of calcium hydroxide [Ca(OH)2], 2% chlorhexidine gel (CHX) on macrophages (RAW 264.7) to produce pro-inflammatory cytokines and nitric oxide after pretreatment with lipoteichoic acid (LTA) of Enterococcus faecalis. Forty-eight human single-rooted teeth were instrumented with R25.08 (RECIPROC) and sterilized by gamma irradiation. LTA was inoculated in the root canal of each specimen for 96 hours. Specimens were instrumented with 40.06 and 50.05 (RECIPROC) and medicated with I) Pyrogen-free saline solution (SS); II) 2% CHX gel; III) Ca(OH)2 + SS; or IV) Ca(OH)2 + CHX for 14 days. Three samples (S) were performed of the root canal of each specimen at S1) immediately after instrumentation; S2) after Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA); S3) after intracanal medication removal. Subsequent quantification of cytokines (IL-1β, TNF-α, MIP-1α, IP-10, G-CSF and IL-6) by immunosorbent assay (ELISA) and nitric oxide by the Griess method was carried-out. Data were submitted to a normality test and then analyzed with one-way ANOVA and Tukey test with a significance level of 5% using GraphPad Prism 6. Ca(OH)2 + SS and Ca(OH)2 + CHX presented lower levels of TNF-α, TNF-α, IL-6, G-CSF and nitric oxide. Ca(OH)2 + SS was the most effective in reducing MIP-1α. CHX was effective in reducing IL-6 and G-CSF. Therefore, the combined intracanal medication of calcium hydroxide and chlorhexidine is effective in reducing the cytokines TNF-α, IL-1β, IL-6, G-CSF and nitric oxide.

RESUMO

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro o efeito do hidróxido de cálcio [Ca(OH)2], clorexidina gel a 2% (CHX) em macrófagos (RAW 264.7) na produção de citocinas pró-inflamatórias e óxido nítrico após pré-tratamento com ácido lipoteicóico (LTA) de Enterococcus faecalis. Quarenta e oito dentes humanos uniradiculares foram instrumentados com R25.08 (RECIPROC) e esterilizados por irradiação gama. LTA foi inoculado no canal radicular de cada espécime por 96 horas. Os espécimes foram instrumentados com 40.06 e 50.05 (RECIPROC) e medicados com I) solução salina apirogênica (SS); II) CHX 2%; III) Ca(OH)2 + SS; ou IV) Ca(OH)2 + CHX durante 14 dias. Três amostras (S) foram realizadas do canal radicular de cada espécime em S1) imediatamente após a instrumentação; S2) após ácido etilenodiaminotetracético (EDTA); S3) após a retirada da medicação intracanal. Foi realizada a quantificação subsequente de citocinas (IL-1β, TNF-α, MIP-1α, IP-10, G-CSF e IL-6) por imunoensaio (ELISA) e de óxido nítrico pelo método de Griess. Os dados foram submetidos a um teste de normalidade e então analisados com ANOVA one-way e teste de Tukey com nível de significância de 5% usando GraphPad Prism 6. Ca(OH)2 + SS e Ca(OH)2 + CHX apresentaram níveis mais baixos de TNF -α, TNF-α, IL-6, G-CSF e óxido nítrico. Ca(OH)2 + SS foi o mais eficaz na redução de MIP-1α. CHX foi eficaz na redução de IL-6 e G-CSF. Sendo assim a associação de hidróxido de cálcio e clorexidina é eficaz na redução das citocinas TNF-α, IL-1β, IL-6, G-CSF e óxido nítrico.