Effect of Milk Renewal on Cell Viability In Vitro at Different Time Frames

ABSTRACT

Abstract The purpose of this study was to evaluate if the renewal of milk as a storage medium, every 12, 24 and 48 h, is able to increase its ability to maintain human periodontal ligament fibroblasts (PDLF) viability over time. PDLF were soaked in Minimum Essential Medium at 37 °C (MEM-37) (positive control), tap water (Water) (negative control) and in skimmed milk (44 wells) at 5 °C and 20 °C. The skimmed milk was renewed every 12 h (Milk-12), 24 h (Milk-24) and 48 h (Milk-48) in 11 wells of each plate, and the milk in the remaining 11 wells of each plate was maintained in situ (not renewed milk) (NRM). After 24, 48, 72, 96 and 120 h, cell viability was determined by the tetrazolium salt-based colorimetric (MTT) assay. Data were statistically analyzed by Kruskal-Wallis, Scheffé and Mann-Whitney tests (a=5%). At 5 °C, only Milk-48 was significantly better than NRM. At 20 °C, NRM was more effective than Milk-12 and Milk-24 in all time periods. In relation to the temperature (5 °C or 20 °C), renewal of milk at 5 °C was better in maintaining cell viability than the renewal at 20 °C. In conclusion, the renewal of milk was able to increase its ability to maintain cell viability only when performed every 48 h in milk maintained at 5 °C.

RESUMO

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar se a renovação do leite, a cada 12, 24 e 48 h, é capaz de aumentar sua capacidade de manter a viabilidade de fibroblastos do ligamento periodontal humano (FLPH) ao longo do tempo. FLPH foram conservados em Meio Essencial Mínimo a 37 °C (MEM-37) (controle positivo), água da torneira (água) (controle negativo) e em leite desnatado (44 poços) a 5 °C e 20 °C. O leite desnatado foi renovado a cada 12 h (leite-12), 24 h (leite-24) e 48 h (leite-48) em 11 poços de cada placa, e em outros 11 poços de cada placa o leite foi deixado in situ (leite não renovado) (LNR). Depois de 24, 48, 72, 96 e 120 h, a viabilidade celular foi determinada pelo ensaio colorimétrico à base de sal tetrazólio (MTT). Os dados foram analisados estatisticamente pelos testes de Kruskal-Wallis, Scheffé e Mann-Whitney (α=5%). A 5 °C, somente o leite-48 foi significantemente melhor do que o LNR. A 20 °C, LNR foi mais efetivo do que o leite-12 e leite-24 em todos os períodos de tempo. Em relação à temperatura (5 °C ou 20 °C), a renovação do leite a 5 °C foi melhor na manutenção da viabilidade celular do que a renovação a 20 °C. Concluindo, a renovação do leite foi capaz de aumentar sua habilidade em manter a viabilidade celular apenas quando realizada a cada 48 h no leite mantido a 5 °C.