Análise da estabilidade de exoantígenos de Paracoccidioides brasiliensis

RESUMO

O diagnóstico da Paracoccidioidomicose (PCM), baseia-se na demonstração do P. brasiliensis (Pb) em amostras biológicas e, indiretamente, por meio de provas sorológicas, sendo a especificidade e sensibilidade diretamente relacionadas à preparação antigênica empregada. A estabilidade de exoantígenos de Pb, produzidos há 15 anos, foi avaliada comparando o perfil de reatividade, por ID, de 75 soros de pacientes com PCM frente a nove diferentes preparações antigênicas antígeno somático (AgSo) e antígeno metabólico (AgM) obtidos das amostras 113 e B-339, antígeno “cell free antigen” (AgCFA) obtido da amostra 113; componente solúvel da superfície externa da parede celular de Pb (CSSEPC de Pb) obtido da amostra 113 e cultivado em ágar Fava Neto, a 36° C durante 5, 10, 15 e 20 dias, antígeno 113 Negroni e antígeno 113 NGTA cultivados por 20dias a 36o C. Por ID verificou-se que a reatividade dos soros de pacientes com PCM foi de 90% para AgSo e CSSEPC de 5, 10, 15 e 20 dias; 86,6% para AgS; 83,3% para AgM; 80% Ag 113 NGTA e 76,6% para Ag113 Negroni. A análise do perfil eletroforético revelou grande complexidade das frações protéicas dos CSSEPCs e exoantígeno 113 Negroni e NGTA, apresentando proteínas com massa molecular entre 25 a 170 kDa. Por “immunoblotting”, confirmou-se a especificidade dos CSSEPC frente a pool de soros da forma crônica bem como da aguda, observando-se que CSSEPC obtidos no 50 e 100 dia, apresentaram intensa reatividade das frações antigênicas de 25, 43, 60, 70, 85 e 160 kDa. Concluímos que os CSSEPC além de estáveis, apresentam determinantes antigênicos altamente conservados, fato comprovado, pelo alto padrão de reatividade observado frente a soros das diferentes formas clínicas de PCM, anti-soros anti-exoantígeno de Pb e anti-gp43