Detecção de DNA de Leishmania spp. em sangue periférico para o diagnóstico da leishmaniose visceral humana

RESUMO

Avaliou-se a reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando iniciadores que amplificam a região conservada do kDNA do mini-círculo mitocondrial de Leishmania spp. para o diagnóstico da leishmaniose visceral (LV) em sangue periférico. O limite de detecção foi de 4,5 atg de DNA total de Leishmania (Leishmania) chagasi (equivalente a 4,5x10-5 parasito). kDNA de Leishmania spp. foi detectado no sangue periférico de 47 entre 53 (89 porcento) pacientes portadores de LV. Não se detectou DNA de Leishmania spp. no sangue periférico de 15 voluntários não-expostos (Detection of circulating Leishmania chagasi DNA for the non-invasive diagnosis of human infection, Trans Royal Soc. Trop. Med. Hyg, in press). A presença de DNA circulante de Leishmania spp. antes, durante e 61 a 259 dias após o tratamento da LV foi avaliada em 20 pacientes. Dezessete deles (85 porcento) apresentaram PCR positivo antes do tratamento. Em 16 (94 porcento) entre este 17 a DNA deixou de ser detectado até a primeira semana após o termino. Apenas uma paciente apresentou PCR positivo durante todo tempo de acompanhamento (259 dias), apesar de recuperação clínica completa (Clearance of circulating Leishmania kDNA after treatment of human visceral leishmaniasis,enviado para publicação). Um oligonucleotídeo Leishmania donovani complexo-específico e, complementar à uma seqüência interna da região conservada do mini-círculo, foi desenhado e utilizado como iniciador reverso adicional ao par de iniciadores que amplificam a região conservada, em ensaio “PCR multiplex”