Caracterização do perfil de resistência da linhagem de leucemia mieloide crônica K-IM, resistente ao imatinibe / [Characterization of the resistance profile of the K-IM chronic myeloid leukemia strain, resistant to imatinib]

RESUMO

O advento da terapia alvo-específica com o imatinibe (IM) transformou o panorama da resposta ao tratamento, progressão e sobrevida dos pacientes de leucemia mieloide crônica (LMC). Apesar do sucesso e do desenvolvimento de inibidores de tirosina-quinase (TKIs) mais potentes, persiste a problemática da resistência ao tratamento. A relevância do estudo dos mecanismos de resistência aos TKIs atualmente reside na frequência das falhas terapêuticas não relacionadas à mutação em BCR-ABL, o principal alvo da terapia. Tendo por finalidade estudar os diversos mecanismos que cooperam para a aquisição de resistência, foi desenvolvida em nosso laboratório uma linhagem de LMC resistente ao IM. A linhagem resistente, denominada K-IM, foi selecionada pelo cultivo dalinhagem K562 em concentrações crescentes de IM, alcançando 1,0 μM do fármaco. Sem apresentar mutação no domínio quinase de BCR-ABL, ela se constitui um bom modelo para oestudo dos outros mecanismos de resistência ao IM. A linhagem apresentou aumento nos níveis deRNA mensageiro (RNAm) de BCR-ABL que não se traduziu em aumento da atividade de Bcr-Abl ou no impedimento da sua inibição pelo tratamento com IM. A linhagem K-IM se mostrou significativamente mais resistente do que a parental. Embora o tratamento com 1,0 μM de IM tenha promovido um acúmulo de células nas fases G0/G1 do ciclo celular, não foi acompanhado deindução à morte celular nem impediu o aumento do número de células em cultura. Foram avaliadas as proteínas transportadoras de efluxo por serem determinantes para a resistência à múltiplas drogas, porém a sua atividade não foi observada na linhagem K-IM...

ABSTRACT

The advent of target-specific therapy with imatinib (IM) has transformed the scenario of response to treatment, progression and survival of patients with chronic myeloid leukemia (CML). Despite the success and development of more potent tyrosine kinase inhibitors (TKIs), the problem of resistance to treatment remains. The relevance of the study of mechanisms of resistance to TKIs currently lies in the frequency of therapeutic failures unrelated to mutation in BCR-ABL, the main target of therapy. Aiming to study the various mechanisms that cooperate for the acquisition of resistance, a CML cell line resistant to IM was developed in our laboratory. The resistant cell line, called K-IM, was selected by culturing the K562 cell line at increasing concentrations of IM, reaching 1.0 μM of the drug. Without presenting mutation in the BCRABL kinase domain, it constitutes a good model for the study of the other mechanisms ofresistance to IM. The cell line showed an increase in BCR-ABL messenger RNA (mRNA) levels which did not result in increased Bcr-Abl activity or in the impairment of its inhibition by IMtreatment. The K-IM cell line was significantly more resistant to IM than the parental cell line. Although treatment with 1.0 μM of IM promoted cell accumulation in the G0/G1 phases of the cell cycle, it was not accompanied by induction of cell death nor prevented the increase in the number of cells in culture. The efflux transporter proteins were evaluated because they aredeterminant for multidrug resistance, but their activity was not observed in the K-IM cell line. Since the antiapoptotic proteins XIAP and survivin are studied as chemoresistance factors, their mRNA and protein levels were evaluated. K-IM showed similar levels to K562 of XIAP mRNA,but showed higher survivin levels in both instances, suggesting that this protein plays a role in its resistance...