Efeito de HDACi combinado com quimioterápico e PI3Ki na proliferação e migração de células do Linfoma de Burkitt / [Effect of HDACi combined with chemotherapy and PI3Ki on proliferation and migration of Burkitt's Lymphoma cells]

RESUMO

O Linfoma de Burkitt (LB) é o subtipo de linfoma de células B mais comum na infância. As recentes descobertas relacionadas à patogênese do LB evidenciaram a ativação da via de PI3K em cooperação com c-Myc no desenvolvimento do LB. Neste estudo, observamos que a via de PI3K/Akt é alvo de Inibidores de Histona Deacetilase (HDACi) em células do LB. A combinação do HDACi (NaB) e quimioterapia (VP-16) inibiu a proliferação e levou a parada do ciclo celular em G2/M com concomitante diminuição na fase S. Análises de microarranjo mostraram regulação diferencial de 500 genes após o tratamento com VP-16, 729 genes com NaB e 1413 genes com a combinação NaB/VP-16, indicando uma possível ação sinérgica dessa combinação. As análises transcricionais revelaram alterações nos níveis de RNAm relacionados com processos como parada no ciclo celular, vias relacionadas com p53, reparo de DNA e fosforilação, incluindo a desregulação de PI3K. Além disso, a inibição do crescimento celular foi relacionada com a redução da fosforilação de Akt e diminuição da expressão de c-Myc em aproximadamente 60% (p≤0.005). Adicionalmente, HDACi levou ao aumento da expressão de miRNAs envolvidos na via de PI3K/Akt e proliferação celular como miR-101, miR-143 e miR-145 em linhagem celular de LB. Os níveis dos mesmos miRNAs estavam extremamente reduzidos em 46 amostras tumorais de pacientes com LB. Uma vez determinada a participação da via de PI3K/Akt na resposta aotratamento com HDACi, investigamos o efeito da combinação de HDACi (SAHA) e inibidor de PI3K LY294002 nas células do LB...

ABSTRACT

Burkitt lymphoma (BL) is a B-cell lymphoma more common in children. The recent discovery in BL pathogenesis highlighted the activation of PI3K pathway in cooperation withMyc in BL development . In this study we demonstrated that PI3K/Akt pathway is a target to HDACi in BL cells. The combination of HDACi (NaB) and chemotherapy (VP16), inhibitedthe proliferation and enhanced the blockage of the cell cycle progression at G2/M with a concurrent decrease in the S phase. Microarray profile showed a synergistic action of NaB/VP-16 combination through the differential regulation of 1413 genes compared to 500 genes regulated by VP-16 and 729 by NaB. Transcriptional analyses showed changes in mRNA levels of pathways related to p53, DNA repair, phosphorylation, PI3K deregulation.Besides, the inhibiton of the cell growth was related to reduced Akt phosphorylation, and decrease of c-Myc protein expression by about 60% (p ≤ 0.005). Moreover, HDACi enhancedthe expression of miRNAs related to PI3K/Akt pathway and proliferation as miR-101, miR-143, and miR-145 in BL cell line. The same miRs were found to be extremely downregulatedin 46 paediatric BL samples. Since PI3K/Akt pathway is involved in HDACi treatment response, we investigated the effect of HDACi SAHA and PI3Ki LY294002 combination in BL cells. The combination leads to cell cycle arrest in G0/G1 fase, cell proliferationinhibition. The SAHA/LY294002 treatment also inhibits the cell migration. The combined treatment decreased the number of polarized cells, observed by α-tubulin and f-actin staining. However it was not related to Cdc42 expression. In addition, SAHA treatment leads to tubulin acethylation, which is HDAC6 target. Rho family as Rho A, B, C; Rac 1, 2 e 3 e Rnd 1, 2 e 3expression increased. Nevertheless, only RhoB protein levels were correlated to qPCR data. In conclusion, our data suggest that a combinatorial approach complementing existingchemotherapy strategies is promising for BL treatment