Saccharomyces boulardii Interfere nas vias de sinalização celular NF-KB, MAPK e TLR/MYD88 alteradas pelo 5-fluorouracil

RESUMO

Introdução: A mucosite induzida por antineoplásicos é um fator limitante na terapiaanticâncer. O trato gastrintestinal é vulnerável por causa da alta proliferação e frequência de renovação celular. Saccharomyces boulardii(SB) é uma levedura probiótica que é utilizadapara proteger a microflora gastrintestinal dodesequilíbrio e de distúrbios gastrintestinais associados. Objetivos: Avaliar o efeito do tratamento com SBna resposta inflamatória e nas vias de sinalização celular (NFkB e MAPK) e nos receptores Toll-like 2 e 4 associados a proteína adaptadora (MyD88)no curso da mucosite intestinal experimental induzida por 5-FU. Métodos: Camundongos machos Swiss (25-30g) foram tratados com 5-FU(450mg/Kg,i.p.)ou com solução salina(controle). OgrupoSB recebeudurante 3 diasconsecutivossomente o SB (1.109UFC/Kg, gavagem)até o dia do sacrifício. Ogrupo 5-FU+SB recebeu SBpor3diasconsecutivosapós a administração do 5-FU. No 4º dia após o 5-FU ou 5-FU+SB, os animais foram sacrificados, amostras de jejuno e íleo foram retiradas e os parâmetros gerais da mucosite foram avaliados (leucograma, perca de peso, diarreia, histologiaeMPO). Utilizou-se também as células Caco2 incubadascom 5-FU (1mM) e SB por 24h. Avaliou-se tambéma inflamação e as vias de sinalização celular, para isso avaliamos aexpressão de NFkB, IkB, MAPK (p-ERK1/2,p-p38, p-JNK), iNOS, citocinaspró-inflamatórias(TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), receptores toll-like 2 e 4 e,MyD88. Utilizou-seos métodos de ELISA e Imunohistoquímica para as análises em tecidos animais e, utilizamos as técnicas de qPCR e de WB para as análises celulares...

ABSTRACT

Introduction: Intestinal mucositis is a frequent side-effect associated to 5-fluorouracil (5-FU) clinical use and results in inflammatory events. It is characterized by epithelial ulcerations in the mucosa and clinical manifestations of abdominal pain, nauseas and diarrhea.Saccharomyces boulardiiis a probiotic yeast which has been shown to protect the gastrointestinal microflora from disequilibrium and from associated gastrointestinal disorders. Aim: To evaluate the effect of treatment with SB in the inflammatory response and in cellular signaling pathways (MAPK and NFkB) and Toll-like receptors 2 and 4, and associated adapter protein (MyD88) in the course of experimental intestinal mucositis induced by 5-FU. Methods: Male Swiss mice (25-30g) were treated with 5-FU (450 mg / kg, i.p.) or saline (control). The SB group received for 3 consecutive days only the SB (1,109CFU / kg, gavage) until the day of sacrifice. 5-FU group received 5-FU+SB for 3 consecutive days after administration of 5-FU. On the 4th day after 5-FU or 5-FU + SB, the animals were sacrificed, samples of jejunum and ileum were removed and the general parameters of mucositis were evaluated (WBC, loss of weight, diarrhea, histology and MPO). It also used the Caco2 cells treated with 5-FU (1mM) and SB for 24h. We also evaluated the inflammation and cellular signaling pathways, for that evaluate the expression of NFkB, IkB, MAPK (p-ERK1 / 2, p38-p, p-JNK), iNOS, inflammatory proinflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, CXCL1, IL-8, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-ɣ), toll-like receptors 2 and 4 and MyD88. Immunohistochemistry and ELISA methods were used for the analysis in animal tissues and used qPCR techniques and WB for cell analysis...