Caracterização de genes de resistência antimicrobiana e seu contexto genético em Klebsiella spp. produtoras de KPC isoladas de hospitais do Estado de São Paulo

RESUMO

Klebsiella pneumoniae produtoras de ESBL estão frequentementeenvolvidas em infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS). ESBLsão capazes de hidrolisar todas as penicilinas, cefalosporinas de amploespectro e aztreonam, sendo os carbapenêmicos o fármaco de escolha parainfecções por microrganismos produtores de ESBL. Porém, Klebsiella spp.produtoras de carbapenemases tem se tornado cada vez mais frequentes.Além disso, já foi descrita, no Brasil, K. pneumoniae produtoras da 16SRMTase, RmtD, uma enzima que confere resistência em nível elevado paratodos os aminoglicosídeos, tornando as opções terapêuticas bastantelimitadas. O objetivo desse trabalho foi caracterizar genes de resistênciaresponsáveis pela produção de ESBL, carbapenemases e 16S RMTases eseu contexto genético em Klebsiella spp. produtoras de KPC isoladas deamostras clínicas provenientes de hospitais do Estado de São Paulo. Cemcepas de Klebsiella spp., isoladas de 2009 a 2011, previamente confirmadascomo produtoras de KPC, foram submetidas a PCR para detecção de blaSHV,blaTEM, blaCTX-M, blaCTX-M-15, blaCTX-M-2, blaCTX-M-8, blaGES-1, blaVIM, blaIMP,blaSPM, blaNDM, blaOXA- 48, armA, rmtA, rmtB rmtC e rmtD e sequenciamentode DNA. Para as cepas negativas para os genes blaSHV foram realizadas aidentificação de Klebsiella spp.a partir de provas bioquímicas, PCR Multiplexpara detecção dos genes blaSHV, blaLEN e blaOKP e sequenciamento dosgenes 16S rRNA e rpoB. Experimentos de transformação e clonagem foramutilizados para a identificação de um novo gene de resistência aosaminoglicosídeos e plasmídeos carreadores de genes de 16S RMTasesforam sequenciados. As cepas apresentaram resistência em nível elevadopara a maioria dos antibióticos testados...

ABSTRACT

Klebsiella pneumoniae producing ESBLs are frequently involved in hospitalinfections in intensive care unit (ICU). ESBLs are capable of hydrolyzing allpenicillins, cephalosporins and aztreonam. Carbapenems are considered theagents of choice for treatment of infections caused by ESBL-producingmicroorganisms. However, Klebsiella spp. producing carbapenemases hasbecome more frequent. Moreover, K. pneumoniae producing 16S RMTase,RmtD, which confers high level resistance to aminoglycosides, have beendescribed in Brazil, limiting the therapeutical options. The aim of this studywas to characterize resistance genes responsible to the production of ESBL,carbapenemases and 16S RMTases and their genetic context in Klebsiellaspp. producing KPC from hospitals at Sao Paulo State. A hundred K.pneumoniae strains isolated in the period of 2009 and 2011 and previouslyconfirmed as KPC producers were subjected to PCR for the detection ofblaSHV, blaTEM, blaCTX-M, blaCTX-M-15, blaCTX-M-2, blaCTX-M-8, blaGES-1, blaVIM,blaIMP, blaSPM, blaNDM, blaOXA-48, armA, rmtA, rmtB rmtC e rmtD and DNAsequencing. Identification of Klebsiella spp. by biochemical tests, detection ofblaSHV, blaLEN e blaOKP genes by Multiplex PCR and 16S rRNA gene and rpoBsequencing was performed on blaSHV negative isolates. Transformation andgenomic cloning were performed for the identification of a newaminoglycosides resistance gene. Sequencing of plasmids carrying 16SRMTases genes was performed. All strains showed high resistance levels formost antibiotics tested...