La ruta de señalización de MAPK Pmk1p y el mantenimiento de la integridad celular del Schizosaccharomyces Pombe / The signaling pathway of MAPK Pmk1p and the maintenance of cellular integrity of the Schizosaccharomyces Pombe

RESUMEN

En Schizosaccharomyces pombe se han descrito tres cascadas de MAPKs la de respuesta feromonas, con Spk1p como MAP kinasa; la de respuesta a estrés en la que Sty1p/Spc1p es la MAPK y la de mantenimiento de la integridad celular liderada por Pmk1p/Spm1p. La eliminación de cualquiera de las kinasas de la ruta de integridad provoca alteraciones morfo-lógicas y células multitabicadas en condiciones de estrés. Todos estos defectos sugieren una función en homeostasis iónica y en la biosíntesis de la pared celular por lo que nos propone-mos estudiar el papel de la ruta de señalización de MAPK Pmk1p en el mantenimiento de la integridad celular en S.pombe. En este trabajo el organismo mayoritariamente utilizado ha sido la levadura de fisión S. pombe y para realizar los trabajos de clonación molecular se utili-zaron también diferentes estirpes de Escherichia coli. Se emplearon diversas técnicas de clonación molecular, métodos genéticos, Western Blot y determinación de la actividad de Pmk1p bajo condiciones de estrés. Las conclusiones más importantes fueron que los "senso-res" "Mtl2p y Wsc1p" señalizan hacia Rho1p, pero no son componentes "auténticos" de la cascada, y sus mutantes no presentan el fenotipo VIC (viable en presencia de inmunosupresor y de iones cloruro), característico de los mutantes en los componentes de la cascada. Mtl2p y Wsc1p no desempeñan un papel importante en la señalización en respuesta a estrés osmótico y daño en la pared celular a través de la ruta de integridad celular de Pmk1p.

ABSTRACT

Three cascades of MAPKs have been described about the Schizosaccharomyces pombe such as the pheromone response with Spk1p as MAP kinase, the stress response in which Sty1p/Spc1p is MAPK, and the maintenance of cell integrity led by Pmk1p/Spm1p. The elimination of any of the kinases of the integrity path causes morphological alterations and multitabicated cells under stress conditions; suggesting a role in ionic homeostasis and cell wall biosynthesis. So, it was proposed to study the role of the MAPK Pmk1p signaling pathway in the maintenance of cell integrity in S.pombe. The organism mainly used was the fission yeast S. pombe and different molecular strains of Escherichia coli were used to carry out the molecular cloning work. Different techniques of molecular cloning, genetic methods, Western Blot and determination of the activity of Pmk1p under stress conditions were used. The most important conclusions were that the "sensors" "Mtl2p and Wsc1p" signal towards Rho1p but they are not "authentic" components of the cascade, and their mutants do not present the Vic phenotype (viable in the presence of immunosuppressant and chloride ion), characteristic of the mutants in the components of the cascade. Mtl2p and Wsc1p do not play an important role in signaling in response to osmotic stress and cell wall damage through the cellular integrity pathway of Pmk1p.