Análisis genético de la resistencia a isoniacida en cepas de Mycobacterium tuberculosis / Genetic analysis of isoniazid resistance in strains of Mycobacterium tuberculosis

RESUMEN

Objetivo: Analizar genéticamente la resistencia a Isoniacida en cepas de Mycobacterium tuberculosis mediante PCR-RFLP de la región S315T del gen katG. Materiales y métodos: El estudio se realizó a partir de cultivos positivos de Mycobacterium tuberculosis receptados en el Centro de Referencia Nacional de Micobacterias, durante el período 2013 ­ 2014. El ADN extraído fue cuantificado y evaluada su pureza, por espectrofotometría. Para determinar el polimorfismo en la región 315 del gen katG a partir de un producto de amplificación de 630 pb se realizó digestiones con las enzimas de restricción MspI y SatI. Resultados: Del total de 498 cepas analizadas, 215 cepas presentaron características fenotípicas de resistencia a isoniacida (32,6 % monorresistencia, 19,5 % MDR y 47,9 % polirresistencia), 283 cepas eran sensibles. 251 cepas correspondieron a pacientes vírgenes al tratamiento (VT); 174 fueron pacientes antes tratados (AT) y 73 fueron pacientes se encontraban con tratamiento (CT). La mayoría de los casos provenía de la provincia del Guayas (77,2 %). La PCR-RFLP-SatI presentó alto porcentaje de sensibilidad (98,6 %) y especificidad (98,2 %), mientras que con la enzima MspI el porcentaje de sensibilidad fue 88,8 % y 7,4 % de especificidad. Conclusión: La PCR-RFLP-SatI demostró ser específica y económica para la detección de resistencia a isoniacida, proporcionando resultados de forma rápida, la aplicación de esta técnica como apoyo para el diagnóstico permitiría al paciente acceder a un tratamiento más oportuno.

ABSTRACT

Objective: Genetically analyze the Isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis cultures by PCR-RFLP of the S315T region of the atG. Materials and methods: The study was carried out in positive cultures of Mycobacterium tuberculosis, received at the National Reference Center of Mycobacteria, during the period 2013-2014. The DNA extracted was quantified and its purity was evaluated by spectrophotometry. To determine the polymorphism in the 315 region of the at G gene, digestions were made with the restriction enzymes MspI and SatI from a 630 bp amplification product. Results: Of 498 culture strains analyzed, 215 strains showed phenotypic characteristics of resistance to Isoniazid (32,6 % monoresistance, 19,5 % MDR and 47,9 % polyresistance) and 283 strains were sensitive. 251 strains corresponded to virgin patients to treatment (VT); 174 were patients before treated (AT) and 73 were patients treated (CT). The majority of cases came from the province of Guayas (77,2 %). The PCR-RFLP- SatI presented a high percentage of sensitivity (98,6 %) and specificity (98,2 %), while with the MspI enzyme the sensitivity percentage was 88,8 % and 7,4 % specificity. Conclusion: The PCR-RFLP SatI proved to be specific and economical for the detection of resistance to isoniazid, providing results quickly, the application of this technique as a support for the diagnosis would allow the patient to access a more timely treatment.