Produção da proteína recombinante Sm15 com potencial para o diagnóstico de pacientes infectados com Schistosoma mansoni

RESUMO

O exame parasitológico por Kato-Katz ainda é considerado o padrão ouro no diagnóstico da esquistossomose mansônica, entretanto, este apresenta baixa sensibilidade para utilização em inquéritos epidemiológicos. Além disso, as técnicas de diagnóstico imunológico, apresentam reações cruzadas com outros helmintos, protozoários e até bactérias como ocorre com a utilização dos extratos brutos do parasita. Nesse sentido, salientamos que Abath et al. identificaram um peptídeo de 15kDa denominado Sm15, que apresentou uma boa reatividade com soros de animais infectados pelo verme e, portanto, possui potencial para abordagens imunoprofiláticas e para testes diagnósticos. Neste estudo obtivemos o polipeptídio recombinante Sm15 em Escherichia coli e verificamos seu potencial para realização do diagnóstico a partir de amostras de soros de pacientes com diferentes manifestações clínicas da esquistossomose. Através de ELISA constatamos que o Sm15 apresentou maior reatividade frente a soros de pacientes esquistossomóticos, quando comparado ao extrato bruto SEA (P=0.0043). O Sm15 ainda demonstrou melhor desempenho ao apresentar maiores valores de sensibilidade, especificidade e área abaixo da curva ROC (P=0.0030). Além disso, o Sm15 foi capaz de diferenciar pacientes esquistossomóticos quanto à forma clínica, aguda ou crônica (P=0.0007). Os resultados obtidos neste estudo indicam, além de ratificar o potencial diagnóstico apresentado pelo polipeptídeo Sm15, que o mesmo poderá ser capaz de gerar uma alternativa de imunodiagnóstico de elevada acurácia, suprindo assim as lacunas existentes com relação aos testes parasitológicos e sorológicos atualmente disponíveis. Além disso, possibilitará o diagnostico precoce da esquistossomose, realização de inquéritos epidemiológicos em áreas de baixa endemicidade, impedindo assim a evolução da doença para formas clínicas de maior gravidade.

ABSTRACT

The parasitological examination by Kato-Katz still considered the gold standard in the diagnosis of schistosomiasis, however, it has low sensitivity for use in epidemiological surveys. Moreover, the techniques of immunological diagnosis, have cross-reactivity with other helminth, protozoa and even bacteria as occur with the use of crude parasite extracts. In this regard, we note that Abath and colleagues identified a 15kDa peptide termed SM15, which showed good reactivity with sera from animals infected by the worm, and therefore has potential immunoprophylactic and diagnostic testing approaches. In this study we obtained the recombinant polypeptide in Escherichia coli SM15 and check its potential for making the diagnosis from samples of patient sera with different clinical manifestations of schistosomiasis. By ELISA we found that the SM15 showed higher reactivity towards sera from schistosomiasis patients, when compared to the crude extract SEA (P = 0.0043). The SM15 also demonstrated better performance by presenting higher sensitivity, specificity, and area under the ROC curve (P = 0.0030). In addition, the SM15 was able to differentiate schistosomiasis patients about the clinical presentation, acute or chronic (P = 0.0007). The results of this study indicate not only ratifies the diagnostic potential presented by the SM15 polypeptide, that it may be able to generate an immunodiagnostic alternative high accuracy, thereby supplying the gaps in the parasitological and serological tests currently available. Also, it enables the early diagnosis of schistosomiasis, carrying out epidemiological surveys in low endemicity areas, thereby preventing disease progression to more severe clinical forms.