Avaliaçäo de diferentes concentraçöes de sacarose e lactose associadas a glicerol 2.0 M no congelamento ultra-rápido de mórulas Mus musculus / Ultra-rapid freezing of Mus musculus morulae with different concentrations of sucrose and lactose associated to 2.0 M glycerol

RESUMO

Seiscentos e vinte e oito (628) mórulas Mus musculus da cepa CF1 Suiço Albina, colhidas 76 a 78 h após a administraçäo de HCG, foram congeladas em soluçäo de PBS modificado contendo glicerol 2,0 M associado a três níveis crescentes de sacarose e lactose (0,125, 0,25 e 0,5 M). Mórulas excelentes (Grau I) e boas (Grau II) foram colocadas em 0,05 ml da soluçäo de congelamento, em grupos de 4 a 11, para um período de desidrataçäo de 5 minutos, a temperatura ambiente (20-23§C), durante o qual foi processado o envase em palhetas de 0,25 ml. Depois de seladas, as palhetas foram mantidas em vapor de nitrogênio (N2) durante 2 minutos, e logo após imersas em N2 líquido. O descongelamento foi efetuado em banho-maria a 37§C, por 20 segundos, sendo a remoçäo do crioprotetor efetuada em 0,5 ml de uma soluçäo contendo o mesmo açucar utilizado no congelamento, nas concentraçöes 0,25 e 0,5 M, durante 5 minutos, a temperatura ambiente. Os embriöes viáveis foram cultivados em PBS modificado + 20//SFB, a 37§C, sendo avaliados 24 e 48 h após o início do cultivo. Foi observada uma reduçäo dos índices de sobrevivência com a utilizaçäo de sacarose e lactose 0,5 M, sendo mais acentuada entre 24 e 48 h de cultivo. No entanto, os índices de sobrevivência se mantiveram praticamente constantes, neste mesmo intervalo, com as concentraçöes 0,125 e 0,25 M de sacarose e lactose. O índice médio de sobrevivência obtido com lactose foi superior ao obtido com sacarose, após 48 h de cultivo (P<0,05). As concentraçöes 0,25 e 0,5 M de sacarose e de lactose foram igualmente efetivas (P>0,05) no processo de remoçäo do crioprotetor. Após a transferência in vivo de mórulas congeladas em glicerol 2,0 M + sacarose 0,25 M, foi obtido um percentual de 50//de implantaçöes e 10//de fetos. Devido ao baixo índice de desenvolvimento fetal observado, a mistura de glicerol 2,0 M + sacarose 0,25 M foi considerada inadequada para o congelamento ultra-rápido de mórulas de camundongos, nas condiçöes deste experimento