Quantificaçåo de plasmócitos produtores de IgA, IgM e IgG em mucosa de intestito delgado de crianças- padronizaçåo do método / Density of IgA, IgM and IgG-producing cells of small bowell mucosa of children

RESUMO

A densidade numérica de plasmócitos produtores de IgA, IgM e IgG, na mucosa do intestino delgado, foi obtido através do estudo das biópsias realizadas em 6 crianças com idade de 15 meses a 7 anos. Duas delas, com imunoglobulina A sérica abaixo dos valores normais para a idade e sem história de diarréia. As outras 4, com diarréia crônica e dosagem de IgA sérica normal. Os fragmentos obtidos por biópsia com a cápsula de Crosby, tamanho pediátrico, foram fixados em formol a 5 por cento, ph 7,0 e lavados em sacarose a 30 por cento e, a seguir, congelados em hexano-nitrogênio líquido. Cuidados especiais foram tomados durante a orientaçåo e inclusåo do material para se conseguirem cortes perfeitamente perpendiculares à muscular da mucosa. Os cortes foram obtidos em criostato e processados para a demonstraçåo de plasmócitos produtores de IgA, IgM e IgG, pela técnica de imunoflorescência direta (Nairn, 1969; Fry & Wilkinson, 1963). A determinaçåo do número de cada categoria de plasmócitos foi conseguida através da aplicaçåo da fórmula morfométrica N= 2n. Vp/A (id + 2t) do método II de Aherne (1967) para contagem de células. Para cada tipo de célula contendo imunoglobulina A, M e G foram efetuadas contagens, segundo dois procedimentos. No primeiro, as contagens individuais de IgA, IgM e IgG de cada caso foram efetuadas, em 200 campos, procedendo-se do seguinte modo contava-se o número de células em campos microscópicos sucessivos, que eram obtidos pela varredura dos cortes da base para o topo (isto é da regiåo da muscular da mucosa até o topo do vilo). A faixa lateral seguinte do corte, a ser varrida, era medida a alguma distância da primeira, partindo a varredura do topo para a base. Neste procedimento nåo se anotava a procedência do campo, se da regiåo superior, média ou inferior da mucosa. Para cada caso, os resultados das contagens individuais de plasmócitos IgA, IgM e IgG apresentaram desvio padråo de elevado valor. Assim, para medidas feitas com 200 campos para células produtoras de IgA, o desvio padråo variava em cada um dos seis casos de dois terços do valor da média até um valor próximo da mesma. Através de testes estatísticos adequados, evidenciou-se que valores confiáveis do número de células por mm3 de lâmina própria de mucosa seriam obtidos somente com contagens de 100 a 200 campos microscópicos. No segundo procedimento de amostragem, planejado após a análise dos dados anteriormente obtidos, os cortes de mucosa foram arbitrariamente divididos em 3 segmentos superior, médio e inferior. O segmento superior ia do topo de vilosidade até a extremidade inferior da regiåo que representava os dois terços superiores do vilo, estendendo-se o médio do limite superior assinalado até a raiz das glândulas intestinais de Lieberkühn e o inferior, do limite inferior acima até a muscular da mucosa. Verificou-se em todos os casos que a concentraçåo de células produtoras de IgA por mm3 de lâmina própria era menor na regiåo superior que na regiåo média, ocorrendo a maior concentraçåo de plasmócitos na regiåo inferior. Para células IgM e IgG, as maiores concentraçoes ocorriam em segmentos médios e inferior, havendo menor concentraçåo celular também ao nível do topo de vilosidade. O desvio padråo das contagens feitas neste segundo procedimento representava aproximadamente 1/5 1 1/13 avos do valor da média. Através de testes adequados, mostrou-se que resultados consistentes do número de plasmócitos produtores de IgA, IgM e IGG podiam ser obtidos em cada caso com contagens apenas de 10 campos da regiåo superior, 10 campos da regiåo média e 10 campos da regiåo inferior. Deve-se destacar que, apesar de se ter detectado, uma variaçåo segmentar da base para o topo, na concentraçåo numérica dos diferentes tipos de plasmócitos em crianças com deficiência parcial de IgA e naquelas com diarréia sem esta deficiência, tal fato nåo deve ser interpretado como indicativo de que este padråo de estratificaçåo tenha necessariamente ocorrência geral.