Análisis peptídico de las proteínas Ro (SSA) y La (SSB) / Peptide analysis of proteins (RO) (SSA) and LA (SSB)

RESUMEN

Se obtuvo extracto total de bazo humano (EBH), purificado por cromatografía de intercambio iónico (DEAE) y filtración molecular; la actividad biológica de las proteínas Ro y La en cada uno de los pasos de purificación fue determinada por pruebas de precipitación en gel e inmunoelectrotransferencia, utilizando sueros monoespecíficos anti-Ro y anti-La. La fracción obtenida en filtración en gel fue sometida a electroforesis en geles de poliacrilamida en condiciones reductoras, las bandas proteicas correspondientes a las proteínas Ro y La fueron eluídas de los geles. El análisis peptídico de las proteínas eluídas fue realizado mediante precipitación con acetona, oxidación, tripsinización, danzilación y separación en cromatografía de capa fina, identificándose con luz UV tres péptidos para Ro y cuatro para La. El contenido relativo de aminoácidos se realizó precipitando las proteínas Ro y La, hidrolizándolas con HCL, esterificándolas y acilándolas para ser inyectadas en un cromotógrafo de gases, permitiendo identificar en la proteína La los animoácidos alanina, glicina, leucina, serina, ácido aspártico, fenilanina, lisina y arginina, y en la proteína Ro alanina, glicina, leucina, serina, ácido aspártico, ácido glutámico, fenilalanina, lisina, arginina, valina e isoleucina