Optimización del análisis de ácidos biliares séricos por método enzimático fluorométrico / Improvement of an enzymatic fluorometric assay for serum bile acids
Acta bioquím. clín. latinoam
;
30(2): 103-9, jun. 1996. ilus, tab
Article
in Spanish
| LILACS
| ID: lil-177469
RESUMEN
Con el objeto de optimizar la determinación fluorométrica de los ácidos biliares séricos (ABS) en cuanto a selectividad y sensibilidad, se desarrolló una metodología de preparación de muestra y preconcentración utilizando columnas de extracción en fase sólida (SPE-C18). Previa desproteinización del suero con acetonitrilo frío, la fase orgánica evaporada y reconstituida con acetonitrilo agua (370), se aplicó a una columna SPE-C18 y los ABS fueron eluidos con metanol. En el extractivo metanólico, evaporado a sequedad y reconstituido con metanol se dosaron los ABS por método enzimático fluorométrico empleando 3Ó-hidroxiesteroide deshidrogenasa, ß-NAD, diaforasa y resazurina. En la validación de la preparación de muestra se utilizó [24-14C] ácido glicocólico. La recuperación fue del 89,0 ñ 1,3 por ciento (SD), con DSR de 1,4 para n=9 (3 días). Se determinaron los ABS en sujetos controles, resultando un valor medio de 2,61 ñ 0,39 µM (SEM) (n=27). La metodología propuesta combina las siguientes ventajas aumento de la selectividad del método enzimático, eliminación de interferencias y preconcentración de los ABS liberados, previamente, de la unión a proteínas plasmáticas
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Index:
LILACS (Americas)
Main subject:
Acetonitriles
/
Calibration
/
Bile Acids and Salts
/
Methanol
/
Clinical Enzyme Tests
/
Fluorometry
/
Glycochenodeoxycholic Acid
/
3-Hydroxysteroid Dehydrogenases
Type of study:
Diagnostic study
Limits:
Humans
Language:
Spanish
Journal:
Acta bioquím. clín. latinoam
Journal subject:
Bioqu¡mica
/
Qu¡mica Cl¡nica
Year:
1996
Type:
Article
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