Resolution of whole proteins of some oral Streptococci by polyacrylamide gel electrophoresis on slab and disc

RESUMO

Com o propósito de se aplicar as técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida em placa vertical e disco como uma contribuiçäo aos estudos de identificaçäo e da caracterizaçäo de Streptococcus orais e ainda ressaltar a capacidade de resoluçäo de cada técnica, amostras de culturas do grupo mutans foram analisadas empregando-se três metodologias distintas na obtençäo de proteínas intracelulares. Amostras de microorganismos foram semeadas em tubos contendo meio de cultura TYE. Em seguida, incubados a 37ºC em jarra de anaerobiose durante 48 horas. Após o crescimento bacteriano, as células foram centrifugadas (3000 rpm - 13 minutos) e lavadas duas vezes em soluçäo estéril de NaCl 0,15 M. Aos precipitados resultantes foram aplicadas as seguintes metodologias Método I - o precipitado final foi ressuspendido em pequeno volume de SDS (solubilizaçäo direta); Método II - ao precipitado resultante, adicionou-se 0,15 grama de pérolas de vidro (74 a 110 µm de diâmetro), o qual foi submetido em seguida à agitaçäo por dois períodos de 3 minutos cada (mod. Phoenix AT 56) - choque mecânico; Método III - o precipitado foi ressuspendido em sacarose 0,5M e EDTA e mantido em banho de gelo por 20 minutos (choque osmótico). As suspensöes finais obtidas foram dissociadas por imersäo em água a 100ºC por 3 minutos. A eletroforese (placa e disco) processou-se em temperatura ambiente a 100 V em corrente constante de 20 mA. De modo geral, os resultados obtidos demonstraram, em primeiro lugar, que as metodologias de solubilizaçäo direta e choque mecânico permitem melhor visualizaçäo e separaçäo das diversas proteínas nos géis. Em segundo, verificou-se que o PAGE em placa permite uma melhor resoluçäo dos perfis protéicos, além de possibilitar que várias amostras possam ser analisadas em um único gel