Assesment of viability of yeast by flow cytometry using light green as vital dye exclusion

RESUMEN

Se compararon dos técnicas para valorar la viabilidad de levaduras por medio de citometría de flujo aplicada a microbiología. En una se usó el colorante yoduro de propidio (YP), el cual al haber un daño de membrana pasa al citoplasma para unirse al DNA o RNA, lo que permite excluir microorganismos dañados de los íntegros, y en la otra se usó el colorante verde claro (VC), ampliamente utilizado en tinciones histológicas, histoquímicas e inmunoquímicas. El modelo de levadura utilizado fue el de muerte por calor en Candida guilliermondii. El análisis de citometría de flujo por diagramas de puntos, en ambos colorantes mostró una separación muy clara de las poblaciónes muertas hacia verde-naranja (350-600 nm) para el VC y rojo (550-725 nm) para el YP, en los canales de fluorescencia correspondientes. Todos los experimentos mostraron entre las poblaciones de levadura vivas y muertas por calor, una prueba de Kolmogorov-Smirnov (K-S) mayor de 99 por ciento de probabilidad de diferencia entre los histogramas de los organismos vivos de los muertos, con una D= con valores de 0.50-0.64 para VC y de 0.91-0.98 para YP. Dado el costo y riesgo de carcinogénesis por el YP, el VC puede ser utilizado en el análisis de viabilidad en levaduras por citofluorometría