Variation in sister chromatid exchange frequencies and cell-cycle kinetics between human whole blood and plasma leukocyte cultures

RESUMO

Os efeitos da concentraçäo de bromodeoxiuridine (BUdR) e o comprimento do período de síntese (S) na freqüência basal de intercâmbios de cromátides irmäs (SCEs)e na taxa de proliferaçäo de culturas de sangue total (WBC) e de leucócitos plasmáticos (PLC) humanos foram estudados. Um método imunofluorescente foi usado para induzir a diferenciaçäo de cromátides irmäs. Este método emprega uma baixa concentraçäo de BUdR para a marcaçäo de cromossomos durante o primeiro ciclo celular in vitro (3,3µM), e o anticorpo monoclonal anti-BUdR conjugado com fluoresceína isotiocianada (FITC) para detecçäo. Permitiu-se que WBC e PLC crescessem durante o primeiro ciclo celular (48h) na presença de BUdR; o meio de cultura foi entäo substituído pelo meio de cultura sem BUdR e as células foram cultivadas por um ciclo celular adicional (24h) até a colheita (72h). Os cromossomos foram contrastados com iodeto de propidium DAPI. PLC mostrou no mínimo um aumento em dobro na freqüência de SCE sobre os valores de WBC e a paralela, independente da concentraçäo de BUdR no meio de cultura, pelo menos na faixa do análogo de base empregada (3,3µM-33,0µM). Além disso, uma estimativa do comprimento do período S, feita pela análise da proporçäo de diferentes tempos de colheira, revelou que PLC tem um período S marcadamente extenso, comparado a WBC. Conseqüentemente, a taxa de deslocamento de fork do DNA de linfócitos em PLC poderia ser mais lenta que em WBC, resultando em um aumento na freqüência de SCE destas culturas.