Ensamble subcelular de la ribonucleoproteína Ro de 60 kDa a los hYRNAs / Subcellular assemble of the ribonucleoproteínas Ro 60 kDa a the hYRNAs

RESUMEN

Ro es un complejo molecular de tres ribonucleoproteínas de 60, 54 y 52 kDa de las que la isoforma de 60 kDa está asociada a uno o varios hYRNAs; se sabe que su ensamble ocurre en el núcleo y en forma de complejo Ro/hYRNA es rápidamente exportado al citoplasma. Este trabajo fue diseñado para determinar si la unión de hYRNA es indispensable para la permanencia nuclear de la proteína Ro de 60 kDa. La interacción entre Ro y hYRNA fue estudiada por inmunofluorescencia y Western blot usando células HEp-2 y anticuerpos anti-Ro. La ribonucleoproteína Ro se localizó en los compartimientos núcleo-citoplásmicos con un patrón granular fino. Para definir si la presencia de hYRNA era esencial en la localización nuclear de Ro se realizaron experimentos adicionales de fluorescencia en células digeridas con RNAasa o tripsina con los siguientes hallazgos. La proteína Ro puede detectarse en el núcleo en ausencia de los hYRNAs, en tanto que su presencia citoplásmica necesariamente está ligada a los hYRNA, ya que la digestión con RNAasa abolió su expresión en citoplasma. El patrón de fluorescencia citoplásmico fue restaurado al reconstituír las células con extractos celulares ricos en hYRNAs. La digestión con tripsina eliminó por completo los gránulos núcleo-citoplásmicos de Ro. Se puede concluir que existen dos pooles nucleares de ribonucleoproteína Ro de 60 kDa, libre y en complejo, en tanto que en el citoplasma solamente existe formando complejos con los hYRNAs