Utilidad del enzimoinmunoensayo para el serodiagnóstico de la histoplasmosis asociada al SIDA / Usefulness of ELISA in the serodiagnosis of histoplasmosis associated with AIDS

RESUMEN

La histoplasmosis es la segunda micosis sistémica potencialmente fatal asociada a la infección por HIV en la República Argentina. Las pruebas serológicas que se emplean rutinariamente en el diagnóstico de esta micosis, tales como inmunodifusión (ID) y fijación de complemento (FC), han presentado un bajo índice de resultados positivos c en los pacientes con SIDA. El propósito de este estudio es estandarizar una reacción de ELISA a fin de mejorar la sensibilidad del serodiagnóstico en la histoplasmosis asociada al SIDA. Se preparó un exoantígeno de la fase levaduriforme de Histoplasma capsulatum (H.c.) que fue utilizado en la reacción de ELISA a la concentración de 5 g de proteína por mililitro. Este reactivo se obtuvo de acuerdo a una técnica expuesta en un estudio anterior. Se ensayaron procedimientos de ELISA en fase sólida, utilizando macro y micrométodos con técnica indirecta no competitiva. Como reactivos básicos se emplearon suero de conejo anti-IgG humana marcado con peroxidasa de rábano y ortofenilendiamina, como conjugado y sustrato respectivamente. Las reacciones fueron leidas espectrofotométricamente a 490 nm. El punto de corte fue calculado como la media de los valores observados en los sueros controles más tres desviaciones estandar. Se estudiaron 26 sueros de pacientes con histoplasmosis mediante el método cuantitativo, 12 de ellos presentaron reacciones positivas con títulos que variaron de 1/2.000 a 1/64.000. Con el micrométodo cualitativo se examinaron 36 sueros de pacientes con histoplasmosis, que fueron procesados a la dilución de 1/400 y 1/800. El 78 por ciento de los mismos presentaron resultados positivos mediante esta técnica, en tanto que la ID y FC sólo brindaron el 33 por ciento y el 47 por ciento de positividad respectivamente. Como controles se estudiaron 8 sueros de dadores de sangre aparentemente sanos y 8 muestras de suero de cada una de las siguientes enfermedades paracoccidioidomicosis, criptococosis, aspergilosis, candidiasis y tuberculosis. Se comprobaron reacciones cruzadas con suero de paracoccidioidomicosis, aspergilosis y candidiasis. Los métodos de ELISA estudiados demostraron ser más sensibles que las pruebas de ID y FC para el serodiagnóstico de la histoplasmosis asociada al SIDA