Protocol for rapid fetal sex determination in chorionic villus through polimerase chain reaction

RESUMO

A determinaçäo do sexo fetal e essencial para o diagnóstico pré-natal de doenças relacionadas ao sexo como hiperplasia adrenal congenita e sindrome de insensibilidade androgenica. As tecnicas de biologia molecular identificam a presença do cromossomo Y através de metodologia mais fácil e rapida do que a técnica citogenetica convencional. Utilizamos DNA extraido de vilo corionico de oito biopsias realizadas entre a 10 e 12 semanas de gestaçäo, para amplificar um fragmento de 778 pb correspondente a sequencia do gene SRY ("primers" XES10-XES11) na determinaçäo do sexo fetal. Como controle interno da reaçäo amplificamos simultaneamente um fragmento de 650 pb do exon 6-8 do gene CYP21B, gene ativo da 21 hidroxilase ("primers" 5' GAGGGATCACATCGTCGTGGAGATG3' e 5'TTCGTGGTCTAGCTCCTCCTG3'). O protocolo utilizado na PCR foi 94 graus C - 2 min; 32 ciclos 94 graus C - 1 min, 63 graus C - 1 min, 72 graus C- 2 min e um ciclo de extensäo de 72 graus C - 10 min. Para confirmaçäo dos resultados da PCR realizou-se cariotipo a partir de cultura de células obtidas atraves de biopsia de vilosidade corionica. Em um caso o material näo foi suficiente para a realizaçäo do cariotipo. Este protocolo foi testado em 200 amostras de DNA extraido de leucocitos de homens e mulheres normais. A amplificaçäo do gene CYP21B ocorreu em todas as amostras enquanto a amplificaçäo do gene SRY apenas nas amostras dos homens. Das oito amostras de DNA extraidas de vilo corionico o gene SRY foi positivo em tres fetos masculinos e negativo nos cinco fetos femininos. O sexo fetal foi confirmado pelo cariotipo ou após o nascimento. Nos concluimos que este protocolo representa um método fácil, rapido e seguro de determinaçäo do sexo fetal