Differential kinetic patterns for Shiga toxin production by Escherichia coli

RESUMEN

El objetivo de este trabajo fue estudiar la cinetica de produccion de los distintos tipos de toxinas Shiga (Stx1; Stx2c) asociadas a Escherichia coli, en cepas de referencia y aisladas de pacientes con Sindrome Uremico Hemolitico (SUH). Las cepas fueron cultivadas en caldo Penassay e incubadas a 37§ con agitacion (200 rpm), tomandose muestras a distintos tiempos (1,5; 3; 9 y 24 horas) para determinar el crecimiento bacteriano y la citotoxicidad libre y asociada a celulas. Para Stx1, a las 3 horas de incubacion, la relacion entre la concentracion intracelular y la extracelular (ic/ec), estuvo comprendida entre 32 y 200 veces. A las 24 horas, ambas concentraciones se igualaron o (ec) resulto 2 veces mayor, dependiendo de la cepa estudiada. Sin embargo, tanto la actividad citotoxica libre como la asociada a celulas presentaron titulos muy bajos. Esto indico una perdida de actividad durante la fase estacionaria que podria deberse al cese de la sintesis de Stx1 o la accion de enzimas proteoliticas. Para Stx2, a las 3 horas (ic) fue igual o 2 veces superior a (ec), a las 34 horas (ec) fue 16 a 32 veces superior a (ic). Para Stx2c, (ec) aumento logaritmicamente con un rendimiento maximo a las 5 horas, permaneciendo luego constante hasta las 24 horas. En ese tiempo (ic) fue dos veces superior a (ec). El estudio de la cinetica de produccion de Stx por cepas de E. coli aisladas de pacientes con SUH demostro que correspondian al tipo Stx2. Estos resultados fueron confirmados por ensayos de citotoxicidad especifica en celulas Vero y por hibridacion con sondas geneticas. El tipo de Stx es considerado uno de los mayores factores de riesgo en la evolucion a SUH en pacientes infectados con E. coli enterohemorragicos. Por lo tanto, la disminucion de la citotoxicidad de Stx1, durante la fase estacionaria de crecimiento, podria explicar la mayor frecuencia de accion entre SUH y cepas de E. coli productoras de Stx2 en distintos paises, incluyendo Argentina