Estudo comparativo de diferentes conjugados de HRP no estudo das vidas neurais das estruturas bucofaciais / Comparative study of free HRP and HRP conjugates in the examination of the connectivity between orofacial structures and the central nervous system

RESUMO

A utilizaçäo de neurotraçadores tem revolucionado, nas últimas três décadas, o conhecimento sobre o padräo de conexöes entre as estruturas periféricas e o sistema nervoso. Entre os neurotraçadores, a peroxidase do rábano silvestre (HRP) tem sido a mais utilizada. Mais recentemente, combinaçöes desse neurotraçador com a aglutinina do germe do trigo (WGA) ou com a subunidade B da toxina colérica (CTB) têm demonstrado um considerável aumento na captaçäo dos conjugados resultantes (HRP-WGA, CTB-HRP), com melhora sensível na capacidade de traçar conexöes neurais. No presente experimento, foram testados ambos os cojugados e o HRP livre no contexto de um amplo estudo sobre o núcleo do nervo hipoglosso do rato, responsável pela inervaçäo motora da língua. Para isto, foram injetados na metade posterior da língua de cada rato 10 µl de HRP (20 por cento) ou 10 µl de CTB-HRP (0,15 por cento de toxina colérica + 12 por cento HRP) ou 10 µl de HRP-WGA (5 por cento de WGA + 30 por cento HRP). Após um período de sobrevivência de 48 horas, os animais foram perfundidos com uma soluçäo de aldeídos e, posteriormente, os encéfalos foram cortados em criostato (40 µm). Os cortes foram submetidos à reaçäo histoquímica do HRP, utilizando-se a tetrametilbenzidina como cromógeno. Os resultados indicam que, tanto desde o ponto de vista qualitativo como até quantitativo, os conjugados säo mais eficientes para evidenciar conexöes neurais que o HRP livre. Os conjugados HRP-WGA e CTB-HRP apresentam qualidades semelhantes, embora este último seja mais eficiente para evidenciar detalhes na arborizaçäo dendrítica e características morfológicas gerais dos motoneurônicos. Essa superioridade do conjugado CTB-HRP pode estar relacionada com a abundância de gangliosídeos do tipo GM1 na membrana pré-sináptica das junçöes neuromusculares. Esses gangliosídeos formam um grupo de receptores específicos para componentes da subunidade B da toxina colérica, o que potencializa a captaçäo da mesma pelos terminais axônicos