Uso de la técnica: pintado de todo el cromosoma (Whole chromosome painting), para identificar cromosomas marcadores en líneas celulares pancreáticas / I use of the technique: colored of the whole chromosome (Whole chromosome paintin), to identify chromosomes markers in pancreatic cellular lines

RESUMEN

La hibridación in situ con fluorescencia, es un método altamente sensible para la detección de secuencias de ADN específicas en metafases preparadas en una lámina portaobjetos. Las aplicaciones de esta técnica de Fish se ven especialmente en la identificación de cromosomas marcadores en metafases de tumores sólidos y malignidades hematológicas. Los cromosomas marcadores son generalmente de origen no conocido y por lo tanto de significado clínico desconocido. La técnica denominada "Whole chromosoma paintin" o pintado de todo el cromosoma es una variante de la técnica de Fish que permite la identificación de cromosomas humanas o fragmentos de estos cromosomas no identificados con bandeo convencional. Este nuevo sistema íncluye una sonda que contiene secuencia única homólogas al ADN del cromosoma que deseamos identificar. Dicha sonda es marcada directamente con espectro o fluorócromo naranja o verde. Esta técnica ha tenido un gran impacto y como otra de las múltiples técnicas de Fish se ha convertido en una herramienta importante, en citogenética de tumores sólidos, en donde el progreso siempre ha sido bloqueado por dificultades técnicas como el obtener metafases de muy buena calidad, por la falta de crecimiento de algunos tumores y la contaminación de células normales con el parénquina tumoral. Sin embargo, esta técnica "Whole chromosoma painting" requiere metafases de alta calidad. Usamos en el presente estudio, sondas ONCOR para identificar cromosomas completos. Las sondas son desnaturalizadas e híbridadas a una metafase del tumor que se encuentra en una lámina portaobjetos. Después que se completa la hibridación , el exceso de sonda es removido mediante lavados. La sonda WCP es detectada por visualización con filtros especiales para espectros verde o naranja en un microscopio de fluorescencia. En el presente estudio, usamos esta técnica para identificar a algunos cromosomas en cierta líneas celulares pancreáticas Pan-1, UACC462, HPAC, Hs700t, Mia Parca2. Nuestros resultados, corroboran estudios previso realizados en nuestro laboratorio, usando bandeo G y FISH convencional con sondas centroméricas.