Organização do genoma de Trypanosoma cruzi: mapeamento físico e genético de uma região de 880 kb dos cromosomas que contém os genes codificadores dos antígenos imunodominantes H49 e JL8 / Genomic organization of Trypanosoma cruzi: physical and genetic mapping of region 880 kb of chromossomes which code imunodominant H49 antigen an JL8 genes

RESUMO

No Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, a maioria das proteínas antigênicas descritas até hoje possuem domínios repetitivos. Em trabalhos anteriores nosso grupo isolou um clone recombinante genômico, chamado H49, que codifica repetições de 68 aminoácidos presentes em um antígeno de alto peso molecular (Cotrim et al., 1990). O antígeno H49 é uma proteína estrutural associada ao citoesqueleto do parasita, localizando-se na região de interação do flagelo com o corpo celular (Cotrim et al., 1990 e 1995). Levin e col. (1989) isolaram um clone de cDNA, denominado JL8, codificando repetições de 14 aminoácidos presentes em uma proteína de 200 kb. O antígeno JL8 tem localização citoplasmática e sua função ainda não foi determinada (Lafaille et al., 1989, Levin et al., 1989). Os antígenos H49 e JL8 contém epitopos imunodominantes reconhecidos por anticorpos presentes na maioria dos soros de pacientes chagásicos crônicos (Franco da Silveira, 1992). O objetivo do nosso trabalho foi anlisar a organização dos genes h49 e jL8, e construir um mapa físico da região cromosômica que contém os loci h49 e jL8. Isto foi feito por análises de "Southern blot" contendo megafragmentos genômicos obtidos por digestões com enzimas de restrição que raramente tem sítios de reconhecimento. Utilizamos também o isolamento de clones YAC com sobreposição ("overlapping") constituindo um "cotig"dos cromosomas. Análises de restrição do DNA genômico e sequencialmento de clones genômicos e de cDNA indicaram que a maioria da proteína H49 é constituída de repetições de 68 aminoácidos, dispostas em tandem. O tamanho do gene foi estimado ser de aproximadamente 8 kb, baseando-se no tamanho do transcrito e da proteína nativa (300 kDa). A conservação dos nucleotídeos entre as repetições indicam que a homogeneização seletiva de sequência, as dá provalvemente através de conservação gênica mantendo conservada a sequência de aminoácidos. As formas alélicas do gene h49 foram mapeadas em dois fragmentos genômicos de cerca de 20 kb gerado por digestão com a enzima de restrição EcoRI. Em algumas cepas um alelo adicional foi localizado em um fragmento Eco RI de 9,7 kb. Baseando-se no tamanho do gene h49 (8 kb) nós assumimos que o fragmento genômico de 9,7 kb deve conter uma cópia do gene h49 enquanto o fragmento de 20 kb conteria duas cópias. Em várias cepas de T. cruzi, os genes h49 e jL8 foram mapeados em duas bandas cromosômicas de 2,6 Mb. ... (au)