Análise físico-química de hormônio de crescimento humano recombinante em diferentes etapas do processo de produção / Physico-chemical analysis of recombinant human growth hormone in different steps of the production process

RESUMO

Padronizou-se metodologia de cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (RP-HPLC) isocrática para determinação de hormônio de crescimento humano recombinante (rec-hGH) em extratos periplásmicos de E. coli. O procedimento possibilitou uma rápida análise inicial da qualidade e quantidade de hGH secretado no espaço periplásmico, imediatamente após, ou mesmo durante a fermentação. Considerando que a RP-HPLC não identifica isômeros de massa, estes foram determinados através da análise paralela dos extratos periplásmicos por cromatografia líquida de alta eficiência por exclusão molecular (HPSEC) e radioimunoensaio (RIE) das frações eluídas. O método permitiu obter em 24 h, do início do processo de fermentação, uma avaliação da atividade, identidade, rendimento e contaminantes relacionados ao hGH. Entre esses incluem-se os sulfóxidos e desamidados, dímero e formas de alta massa molecular. As metodologias padronizadas foram empregadas em diferentes etapas da produção de rec-hGH. O processo de fermentação de E. coli transformada foi otimizado, escolhendo-se o melhor tempo de ativação, que propiciou maior nível de secreção de hGH e a menor quantidade de formas alternadas. Analisou-se uma das primeiras fases do processo de purificação, confirmando-se a ausência de perdas significativas em formas poliméricas. A liofilização foi aprimorada, possibilitando a preparação e estudo de diferentes padrões. Todos esses estudos acrescentaram importantes conhecimentos para o controle de qualidade do produto farmacêutico injetável. que foi realizado de acordo com as recomendações das Farmacopéias Européia e Brasileira