Trypanosoma cruzi: associação entre infectividade e expressão de glicoproteínas de superfície com atividade sinalizadora de cálcio / Trypanosoma cruzi: association between infectivity and expression of surface glycoproteins with calcium signaling activity

RESUMO

Neste trabalho investigamos alguns aspectos do processo de invasão celular do T cruzi associados à mobilização de cálcio no parasita e na célula hospedeira. Traçamos como principais objetivos: a) determinar se existe correlação entre a capacidade de formas metacíclicas de diferentes cepas de T cruzi em invadir células de mamífero e a expressão de moléculas de superfície gp9O, gp82 e gp35/50. b) analisar comparativamente a capacidade da gp9O, gp82 e gp35/50 de induzir sinal de Ca 2+ na célula hospedeira e/ou no parasita. Os resultados de ensaio de invasão celular mostraram que as formas metacíclicas da cepa CL invadem células de mamífero (Hela, Vero) em maior número (6-8 vezes) em comparação à cepa G. A análise da expressão das glicoproteínas de superfície gp9O, gp82 e gp35/50 através da marcação das formas metacíclicas com 125I seguida de imunoprecipitação, "immunoblotting" e citometria de fluxo, revelou que a cepa G difere da cepa CL pela expressão de gp9O e pela presença de maiores níveis de gp35/50. Quanto à gp82, cuja expressão é comparável nas duas cepas. a análise da seqüência de amlnoácidos, deduzida a partir da seqüência de CDNA. revelou 97,9 por cento de identidade entre a cepa G e CL. Mostramos que o extrato sonicado de formas metacíclicas (G e CL) é capaz de induzir o aumento de [Ca2-]i em células Hela, e que grande parte dessa atividade é devida à gp82, a julgar pela inibição de 50-70 por cento que resulta da incubação do extrato parasitário com o anticorpo monoclonal 3F6 dirigido contra a gp82. Nos experimentos com a glicoproteína purificada de tripomasstígotas metacíclicos, observamos que: a) a gp9O, gp82 e gp35/50, ligam-se às células Hela de maneira dose dependente e saturável, o que caracteriza uma ligação do tipo receptor-dependente. b) a gp82 induz maior aumento de [Ca2+]i nas células Hela quando comparada à gp35/50, enquanto a gp9O não induz a mobilização de Ca2+ de maneira significativa, do mesmo modo que a gp63 de Leishmania (L.) amazonensis, utilizada como controle. c) as proteínas recombinantes contendo as sequencias da gp9O ou da gp82, geradas em bactérias, ligam-se às células Hela do mesmo modo que as moléculas nativas, indicando que os carboidratos das cadeias oligossacarídicas ou a âncora GPI não estão envolvidas na adesão à célula hospedeira. Observamos nos ensaios de mobilização de Ca2+ intracelular nas formas metacíclicas observamos que a mesma é induzida pelo extrato ...(au)