Análise mutacional da região amino-terminal da subunidade beta do fator 2 de ínicio de tradução (elF2) / Mutational analysis of de N-terminal region of the beta subunit of elF2

RESUMO

elF2 está envolvido na seleção do codon AUG para inicio de tradução em eucariotos, uma vez que em levedura, mutações em suas três subunidades foram identificadas por permitirem o reconhecimento de um codon UUG pelo anti-codon do Met-tRNAiMet. A subunidade beta de elF2 contém um motivo que poderia mediar interações com RNA compreendido por três blocos de sete resíduos de lisina, os quais são altamente conservados evolutivamente. Neste trabalho foi realizada uma análise de deleções nesta proteína em Saccharomyces cerevisiae, a qual indicou que somente um bloco de lislnas é suficiente para manter sua função "in vivo", provavelmente devido à carga, uma vez que a troca destes aminoácidos por arglnina, mas não por alanina, manteve a viabilidade celular. A remoção de qualquer um dos bloco de lisinas não afeta a expressão de GCN4. Entre as duplas deleções, somente aquela em que permanece o segundo bloco levou a uma marcada desrepressão de GCN4. A tripla deleção resultou em altos níveis de expressão de GCN4, correspondendo a um fenótipo dominante negativo, indicando que este alelo pode ainda estar mantendo uma função parcial, competindo com a proteína selvagem e proporcionando um defeito na síntese protélca. Esta proteína deletada associa-se com elF2a e elF2g e é encontrada no complexo de pré-iniciação. A ligação de mRNA "in vitro" a proteínas de fusão GST-elF2b é dependente dos blocos de lisinas, sendo mantlda na presença de um único bloco de lisinas ou argininas, mas não de alaninas. A ligação de elF2 ao mRNA é dependente da presença dos blocos de lisinas na subunidadeb. A ligação de elF2 a Met-tRNAiMet de forma GTP-dependente não é afetada pela ausência das repetições de lisinas. Os resultados obtidos aqui fornecem fortes evidências do papel dos blocos de lisinas de elF2b em manter a interação com mRNA "in vivo"