Estudo comparativo da expressão do gene da resistência a múltiplas drogas (MDR1), da expressão e da função da glicoproteína-P em linfócitos de indivíduos normais e em portadores de leucemia mielóide aguda e leucemia mielóide crônica agudizada / Comparative study of multidrug resistence gene (MDR1) expression and expression and function of glycoprotein-P in normal lymphocytes and in acute myeloid and blastic crisis of cronic myeloid leukemias

RESUMO

Um dos mais importantes mecanismos de resistência ao tratamento quimioterápico é o associado à expressao do gene de resistência a múltiplas drogas (MDR1} e de seu produto, a glicoproteína-P (gp-P). Esta proteína de transporte da membrana celular protege as células alvo através do efluxo dos agentes citotóxicos ministrados. A expressao do fenótipo de MDR é, por si, fator de pior prognóstico nas LMA. A grande variabilidade na frequência de resultados positivos observada na literatura (20 por cento a 80 por cento ), entretanto, demonstra a necessidade de padronizaçao das técnicas envolvidas na análise deste fenótipo. A identificaçao, em trabalhos anteriores, de casos onde a expressao e a funçao da gp-P foram discordantes e a observaçao de que o efluxo da gp-P pode ser inibido por certas substâncias utilizadas na clínica, evidenciaram a necessidade de associar à avaliaçao do fenótipo, a análise funcional da gp-P. No presente estudo avaliamos comparativamente os três níveis de expressao do fenótipo MDR em 19 portadores de LMA (l3 de novo, 3 em recidiva, 2 LMC agudizadas, l secundária a síndorme mielodispiásica), utilizando, como controle, linfócitos do sangue periférico de indivíduos normais e células das linhagens CCRF-CEM e CEM/VLB através dos ensaios (a) de expressao do gene MDR1 pela RT-PCR, (b) de expressao da gp-P com antícorpo monoclonal específico (MRKl6) e (c) de funçao da gp-P através do efiuxo de corante fluorescente - rhodamina 123 (rh l 23) - e inibiçao deste efluxo com verapamil . Obtivemos amplificaçao do gene em todas as amostras. A expressao do MDR1 mais alta (>30 por cento ) foi observada em todos os linfócitos normais e em 47 por cento dos pacientes. Nas leucemias, esta expressao gênica mais alta se correlacionou com a leucometria elevada (p=O,O3). Na avaliaçao da expressao e da funçao da gp-P, o teste estatístico de Kolmogorov-Smirnov (valor D) permitiu distinguir melhor as amostras com baixa porcentagem de células positivas. A expressao da gp-P esteve presente em todos os linfócitos normais e em 84 por cento dos pacientes. A avaliaçao da atividade funcional da gp-P em celulas blásticas previamente caracterizadas quanto aos mercadores de linhagem e à marcaçao com MRKl6 permitiu identificar precisamente o efluxo nestas células. Observamos aumento da atividade funcional da gp-P e efluxo de rhl23 inibido pelo verapamil em todas as amostras de linfócitos. Nas leucemias, as amostras positivas foram 89 por cento...(au)