Estudo das vias de co-estimulaçäo envolvidas na proliferaçäo linfocitária por células endoteliais humanas, na presença de fitohemaglutinina / Study the costimulatory pathways involved in the activation of CD4+T cells human in the presence of phytohemmagglutin

RESUMO

A ativação de linfócitos T envolve a ligação do receptor dos linfócitos T (TCR) ao complexo CMH/peptídeo antigênico, denominado de primeiro sinal, e a interação de moléculas de superfície presente nas células endoteliais e seus ligantes linfocitários, o segundo sinal, Ou simplesmente co-sinal. Ausência do sinal induz As células endoteliaís são capazes de capturar, processar e apresentar antígenos aos linfócitos T, com capacidade de co-estimulação superior aos fibroblastos, células musculares lisas e epiteliais. Classicamente, as células endotelais ativam células T de memória e induzem anergia em células T naives. Estudamos as vias de co-estimuiação envolvidas na proliferação linfocitária induzida por células endoteliais humanas. Linfócitos T CD4+ e CD8+ de adultos e linfócitos T CD4+ e T CD4+/CD45RA+ de cordão umbilical foram utilizados como células respondedoras na cultura mista (CMEL). Células endoteliais imortalizadas, ECV-304, e as derivadas da veia do cordão umbilical, HUVEC, foram usadas COMO células estimuladoras. Linfócitos T CD4+ naives foram obtidos por seleção positiva com anticorpos anti-CD45RA e posterior depleção com anti-CD45RO. A pureza desta subPopulação foi de 98 por cento. PHA na concentração de 5OnglmL foi acrescentada na CMEL. A Proliferação foi medida por incorporação de timidina triciada. Anticorpos monoclonais foram utilizados contra as moléculas de co-estimulação presentes nas células endoteliais e linfocitárias. Foi calculada a porcentagem de inibição da Proliferação linfocitária dê cada anticorpo em comparação ao seu controle isotípico. Células endoteliais induziram Proliferação das células respondedoras somente na presença de PHA. Nas CMEL com ECV-304 e linfócitos T CD4+ de adulto, obtivemos as porcentagens de inibição com os seguintes anticorpos anti-CD2 (clone T11; 98.2+12.4), anti-CD58 (clone BRlC5; 57.6+-11), anti-CD59 (MEM43; 50+11), anti-CD11a (AFOL-1; 70.7+15), anti-CDl8 (7E4; 58.9+16.6), anti-CD54 (BBIG-1L; 68.8+15.6), anti-CD102 (BT-1; 30.9-+11.9) and anti-CDl54 (24-31; 26.7-+11.9). Não obtivemos inibição nesta proliferação, com os AcMo dirigidos contra CD27, CD3O, CD7O, CD28, CDl37, CDlO6, CD29, CDlO6, CD49d e com a proteína de fusão CTLA4-ig. Nas CMEL com HUVEC e linfócitos T CD4+ de sangue de cordão, obtivemos as seguintes porcentagens de inibição anti-CD2 (clone T11, 64.8+16.1), anti-CD58 (clone TS2/9; 63.6ñ13.6), anti-CD59 (MEM43; 36ñ10.9), anti-Cd11a (AFOL-1; 33.4ñ12, anti-CD18 (7E4; 25ñ11.4...(au)