Long-Term Bone Marrow Culture: a laboratorial procedure that mimics hemopoiesis

RESUMO

Várias técnicas de cultivo celular têm sido utilizadas na investigaçäo de fatores que influenciam a proliferaçäo e a diferenciaçäo das células tronco hemopoéticas, tornando-se fundamentais na elucidaçäo dos mecanismos que envolvem a produçäo de células sanguíneas.Este trabalho descreve um sistema de cultura onde ocorre proliferaçäo e diferenciaçäo de células hemopoiéticas primitivas de medula óssea normal. Usou-se células de medula óssea de 18 doadores que foram cultivadas, por 10 semanas, em meio sintético com antibióticos, enriquecido com soros fetal bovino e de cavalo. Após serem as culturas alimentadas semanalmente, as células do sobrenadante foram quantificadas e ensaiadas para estimativa de seu conteúdo em progenitores hemopoéticos através de ensaios clonogênicos de Unidades Formadoras de Colônias (CFU). Simulteamente, desenvolveu-se, na base do frasco de cultura, uma camada estromal contendo uma populaçäo de células aderentes, que também foram contadas e ensaiadas para estimativa de seu conteúdo em progenitores hemopoéticos. A fraçäo celular do sobrenadante decaiu de 1,65 x 107 para uma média de 1,25 x 105 células mononucleares/frasco de cultura após a sétima semana de cultivo. Um plateau pôde ser observado entre a quinta semana e o final do experimento. Colônias de GM-CFC de ambas fraçôes foram detectadas em todas as semanas ensaiadas e mostraram-se em maior número na camada aderente. Hemopoese, em especial granulomono-poese, pôde ser mantida in vitro nas condiçöes experimentais testadas e a camada estromal demonstrou capacidade de sustentar uma populaçäo de células tronco em proliferaçäo e diferenciaçäo por pelo menos 10 semanas.