Construcción de genotecas genómicas de Plasmodium falciparum, selección de clonos que codifiquen para calmodulina y para la secuencis repetitiva PFCOL692, secuenciación de PFCOL692 / Construction of genomic libraries for plasmodium falciparum, selection of clones codifying for calmodulina and the repetitive sequence PFCOL 692, determination of PFCOL 692 sequence

RESUMEN

En el presente trabajo se reporta el primer DNA satélite (PFCOL692) aislado para Plasmodium falciparum. La unidad básica es una secuencia de aproximadamente 700 pares de bases (pb). Las dos variantes secuenciadas presentan una homología del 85 por ciento. Los patrones de bandas producidos al hibridar digestiones de DNA del parásito con el DNA satélite marcado radioactivamente, permitieron detectar la existencia de muchas más variantes. Además, las variantes se encuentran a nivel subtelomérico organizadas en bloques de seres unidos cabeza a cola. Por la localización esta secuencia debe jugar un papel importante en los rearreglos que producen polimorfismo cromosómico y antigénico en Plasmodium falciparum. De los patrones de bandas obtenidos por la hibridación de esta secuencia con DNA de diferentes aislados digeridos con enzima de restricción, se pudo ver la utilidad de esta secuencia para caraterizar cepas en el laboratorio. Se construyó una genoteca de Plasmodium falciparum en el fago Lambda EMBL-4 y fueron aislados 28 clonos que contienen la secuencia PFCOL692. El resultado del manejo de restricción de los clonos (en otro trabajo) confirman la organzación planteada. Como otra parte del trabajo se construyó una genoteca de Plasmodium falciparum en el fago Lamda gt10. Se diseño una sonda de oligonucleótidos con base en la secuencia del gen de calmodulina de Plasmodium falciparum. Con la sonda, se aisló un clon que contiene la mayoría del gen de calmodulina del parásito