Valoración de endotoxinas bacterianas en sueros antiofídicos de origen equino: optimización de métodos en el control de la calidad / Evaluation of bacterial endotoxins in equine antiophidic sera: quality control methods optimization

RESUMEN

Se valoró la presencia de pirógenos en el antisuero contra venenos de serpientes de los genéros Bothrops, Crotalus y Lachesis elaborado por la planta de producción de sueros antiofídico del Instituto Nacional de Salud en Bogotá Colombia. Se evaluó materia prima, proceso y producto terminado utilizando las técnicas de pirógenos en conejos USP y limulus amebocito lisado (LAL). Los resultados por los dos métodos de análisis para los cinco lotes de materia prima fueron negativos a pirógenos y positivos para los ocho lotes analizados de producto terminado en los que se determinó por LAL niveles de endotoxina entre >13.87 UE/ml y > 24.7 UE/ml; superiores al permitido por la Farmacopea Americana USP XXIII, que fija un valor máximo de 1.67 UE/ml para este tipo de producto. Se estandarizó el uso de la técnica del LAL en el suero de origen equino utilizado como materia prima, el cual presenta inhibidores naturales para la técnica; mediante pretratamientos al plasma para la extracción de inhibidores aplicando diferente técnicas, con los siguientes resultados de mayor a menor capacidad de detección de endotoxina técnica de sulfato de amonio hasta 0.125 UE/ml; técnica de dilución calor 0.21 UE/ml; técnica de cloroformo dilución 0.42 UE/ml y la técnica con ajuste de pH no detécto endotoxina en la muestra. Se valoró la potencialización de las muestras sometidas a extracción, con la adición de iones mono y divalentes. Se ensayaron los iones NaCl, MnCl, CaCl subíndice 2 y MgCl subíndice 2, en concentraciones de 0.02, 0.05, 0.08M. El mejor resultado se obtuvo con los iones MgCl subíndice 2 y CaCl subíndice 2 a 0.05M, asociado a la técnica de extracción de cloroformo y dilución, en la que aumentó la detección de endotoxina de 0.42 a 0.125 UE/ml con MgCl subíndice 2 y de 0.42 a 0.35 UE/ml con CaCl subíndice 2. Se concluyó que la técnica del LAL ajustada con la técnica sulfato de amonio y calor y la adición MgCL subíndice 2 a 0.05M, sirve como prueba de control para ser aplicada a la materia prima. En el estudio se demostró que durante el proceso de purificación de las inmunoglobulinas, el producto se contamina con endotoxinas bacterianas; fueron responsables de esta contaminación 11.44 por ciento de los materiales, 51.17 por ciento de los equipos y 2.35 por ciento de los reactivos utilizados. Se detecto endotoxinas en 64.96 por ciento de las mustras analizadas. La aplicación del método del LAL en la línea de proceso permitió...