incorporación de la técnica de RT-PCR para la detección del virus sincitial respiratorio / Incorporation of the RT-PCR technique to the detection of respiratory syncitial virus

RESUMEN

Objetivo: Estandarizar e incorporar técnicas de biología molecular, RT-PCR para la detección del virus sincitial respiratorio que complementen y enriquezcan el diagnóstico.Material y métodos: se utilizaron cepas de referencia del virus sincitial respiratorio de los grupos A y B (virus stock ATCC), las cuales se propagaron y titularon en células HEp-2. Se realizaron pruebas de inmunofluorescencia indirecta y de la prueba RT-PCR. Para ello se extrajo el ARN del virus con trizol, se realizó una transcripción reversa para obtener ADNc y, para la PCR se utilizaron oligonucleótidos que amplifican un fragmento del gen de la proteína G del virus sincitial respiratorio. Para comprobar la especificidad de la prueba se utilizaron virus de la misma familia (sarampión y parainfluenza) y virus de diferentes familias (influenza y adenovirus). Al evaluar la sensibilidad se utilizaron diferentes diluciones del ADNc viral.Resultados: en el cultivo, el efecto citopático se puede observar claramente del cuarto al octavo día. La prueba de inmunofluorescencia como se sabe es una técnica sensible y específica para el virus. La RT-PCR que se desarrollo, fue efectiva para la amplificación del ADNc; además, mostró ser específica para el virus sincitial respiratorio, ya que no amplifica material genético de otros virus incluyendo a aquellos que pertenecen a la misma familia. La sensibilidad de la prueba es alta, alcanzando a amplificar hasta picogramos de ADNc.Conclusiones: la rapidez de la inmunofluorescencia, permite dar un diagnóstico presuntivo que después puede ser comprobado por el aislamiento y propagación del virus en cultivo celular. La técnica de RT-PCR con los oligonucleótidos que utilizamos fue sensible, específica y rápida, por tanto debe ser tomada en cuenta para el apoyo al diagnóstico clínico. Con lo anterior, no se trata de sustituir las técnicas tradicionales, sino contar con mayores opciones y además reforzarlas; de esta manera, se podrá fundamentar mejor el diagnóstico de las infecciones virales.