Estudo da taxa de apoptose em neutrófilos humanos expostos à soluçäo salina hipertônica e lipopolissacarídeo / Study of apoptosis'rate in human neutrophils exposed to hypertonic saline solution and lipopolysaccharide

RESUMO

A solução salina hipertônica (SSH) vem demonstrando uma série de ações imunomoduladoras em leucócitos humanos. Neste trabalho, leucócitos polimorfonucleares humanos (PMN) foram submetidos, "in vitro", à SSH na concentração de 500mOsm e a lipopolissacarídeo (LPS) com o objetivo de estudar a) a influência da SSH nas taxas apoptose dos PMN e b) o efeito da interação da SSH com o LPS nas referidas taxas. Após o isolamento de PMN humanos de voluntários sadios, foram realizados os experimentos a) as soluções com PMN foram expostas à SSH na osmolaridade final de 500mOsm por períodos de tempo de 20, 40, 60 e 120 minutos; b) as soluções com PMN foram expostas ao LPS e em seguida à SSH, por 60 minutos a cada solução. Em outra amostra, os PMN foram submetidos previamente à SSH e em seguida a LPS, por 60 minutos a cada solução. Após os experimentos, todas as soluções foram centrifudagas e ressuspensas em meio isotônico por 16h, sendo submetidas à quantificação da apoptose por citometria de fluxo (citômetro Coulter EPICS XL-MCL), através da análise do DNA hipodiplóide corado com "propidium iodidae". Na análise estatística foi utilizado o programa STATISTICA for Windows (Copyright), em pregando-se o método do T-pareado. Conclui-se que as taxas de apoptose em PMN, "in vitro" I) elevam-se de forma estatisticamente significativa com a a exposição à SSH, ocorrendo aumento das taxas com o tempo de exposição; II) são alteradas de forma estatisticamente significativa conforme a ordem de exposição à LPS e SSH ou vice-versa a) PMN ativadas por LPS não sofrem influência da exposição subseqüente à SSH, demonstrando taxas similares à exposição isolada ao LPS; b) a exposição prévia de PMN à SSH, anula o efeito inibidor da apoptose do LPS, produzindo taxas sem diferença estatisticamente significativa do controle