Establishment of an adherent cell layer from human umbilical cord blood

RESUMO

As células-mäe säo encontradas no sangue do cordäo umbilical humano (HUCB), além de na medula óssea e no sangue periférico, e há um crescente interesse no uso desse material como uma fonte alternativa para transplante de medula óssea e terapia gênica. A hematopoiese in vitro tem sido mantida por até 16 semanas em culturas de HUCB, mas o estabelecimento de uma camada estromal aderente tem invariavelmente falhado. Precursores de células aderentes foram pesquisados entre células mononucleares do HUCB em culturas a longo prazo. Células mononucleares obtidas do sangue do cordäo depois de partos normais a termo foram cultivadas em diferentes concentraçöes em meio Dulbecco modificado por Iscove, com alimentaçäo semanal. Uma camada aderente foi detectada em 16 de 30 culturas, 12 das quais em concentraçöes celulares maiores que 2 x 10(potência 6) células/ml. Ao contrário das culturas de medula óssea, em que o estroma é detectado precocemente, na maioria (10/16) das culturas positivas do HUCB a camada aderente foi identificada apenas depois da quarta semana de cultura. As células nunca atingiram a confluência e se destacaram da placa aproximadamente quatro semanas após sua detecçäo. A coloraçäo de culturas positivas por May-Grünwald-Giemsa revelou células aderentes semelhantes a fibroblastos ou semelhantes a células endoteliais em um arranjo diferente daquele do estroma da medula óssea em 13 amostras. Em duas dessas, as células aderentes estavam organizadas em cordöes característicos e delimitados de células. Ao contrário das culturas de medula óssea, células gordurosas nunca foram observadas nas camadas aderentes. Um rápido desenvolvimento de grandes células mielóides na primeira semana de cultura foi característico de culturas negativas e essas células mantiveram-se por até 12 semanas. HUCB contém precursores de células aderentes que ocorrem em números menores do que na medula óssea e podem estar em um estágio diferente (possivelmente menos maduro) de diferenciaçäo.