Determinación de la concentración inhibitoria mínima a partir de parâmetros cinéticos de crecimiento / Minimum inhibitory concentration determination by kinetic parameters of growth

RESUMEN

Se evaluó la actividad bacteriostática de 2',4-dihidroxichalcona y 7-hidroxiflavanona frente a Staphylococcus aureus ATCC 25 923 y Escherichia coli ATCC 25 922, utilizando una técnica cinética turbidimétrica original y comparando los resultados logrados por otras metodologías tradicionales (difusión en agar, dilución en agar, macrodilución en caldo). El nuevo procedimiento propuesto comprende la determinación de curvas de crecimiento de los microorganismos en medios aireados: una serie de erlenmeyers de 500 ml provistos de cortacorrientes, conteniendo 100 ml de caldo nutritivo fueron acicionados de las soluciones de las drogas en concentraciones crecientes desde 10 a 200 ug/ml agregando a uno de ellos el diluyente sin droga como control; cada enlenmeyer fue sembrado con 2 ml de inóculo y colocado en mesa agitadora dentro de una cámara de cultivo. Alícuotas de los cultivos fueron extraídas durante 5 h cada 20 min y se efectuó la lectura de transmitancia a 720 nm. La concentración celular a diferentes tiempos se obtuvo por medio de la relación 1n N = 27,4 - 10,3.T, para S. aureus y 1n N = 27,1 - 8,56.T para E. coli (N:ufc/ml y T: transmitancia). A partir de las representaciones gráficas de 1n N ante tiempo, se midieron las velocidades específicas de crecimiento de las bacterias u para cada concentración de droga (C), determinándose por medio de regresión no lineal la ecuación: µT-A.[C]/(1+B;[C] (µt: velocidad específica de crecimiento para [C]=0 (testigo); A y B: constantes empíricas propias de cada sistema droga-microrganismo). La concentración inhibitoria mínima se calculó con la expresión: CIM = µT/(A - µT.B), obtenida de la anterior, haciendo µ=0. Los valores de CIM obtenidos de esta forma son en general mayores que los determinados con las metodologías tradicionales. La metodología propuesta, en apariencia más laboriosa, presenta las siguientes características: fácil estandarización de los inóculos; cálculo de la CIM con pocas determinaciones de µ en presencia de distintas concentraciones de droga; interpretación de la inhibición total o parcial de diversos microorganismos con ecuaciones sencillas; útil para la evalación de la actividad antibacteriana de nuevos compuestos sintéticos y naturales; económica; resultados altamente reproducibles y un tiempo adecuado de duración del ensayo.