Caracterización bioquímica de prolactina de diferentes especies / Biochemical characterization of prolactin of different species

RESUMEN

Se utilizaron diferentes técnicas para determinar las características bioquímicas de las preparaciones de prolactina (Prl) de origen hipofisario con preparados que se utilizan en centros de investigaciones para el desarrollo de sistemas in vivo e in vitro, bioanálisis, radioinmunoanálisis y análisis inmunoenzimáticos. Los preparados se analizaron por electroforesis bajo condiciones reductoras (SDS-PAGE), electrotransferencia e inmunodetección, enfoque isoeléctrico, cromatografía líquida de alta presión (HPLC), y capacidad de unión a receptores microsomales (RRA). Se encontró que en las Prl (s) porcina (pPrl), ovina (oPrl) y humana (hPrl) existen proporciones significativas de la forma glucosilada (30-40 porciento), no así en la Prl bovina (bPrl) y en la de rata (rPrl). Se comprobó que es posible detectar impurezas o mezclas de las diferentes formas moleculares de la Prl presentes en estos preparados hipofisarios utilizando HPLC. El análisis por enfoque isoeléctrico de las Prl (s) hipofisarias de diferentes especies reveló que en la bPrl existen 4 isoformas de carga eléctrica, la oPrl y la hPrl están compuestas por 3 isoformas mientras que la rPrl y la pPrl presentan 1 y 2 isoformas, respectivamente. Aún se desconoce cuál podría ser el significado fisiológico de las isoformas de carga eléctrica en la Prl hipofisaria de diferentes especies. Según los resultados obtenidos a partir de las curvas de desplazamiento y de las gráficas de Scatchard, se encontró que existen diferencias entre las constantes de disociación (Kd) y la capacidad de unión de las prolactinas a los receptores microsomales. Finalmente es necesario conocer con mayor exactitud las propiedades bioquímicas, inmunológicas y biológicas de los preparados de las prolactinas que son utilizadas en diferentes estudios tanto in vivo como in vitro, porque en esas residen las funciones biológicas de la hormona. Se confirmó y se amplió la heterogeneidad estructural de la Prl en diferentes especies de mamíferos, que dan lugar a la existencia de diferentes variantes moleculares de la hormona y a la diversidad de funciones que ejerce. Se comprobó la necesidad de desarrollar nuevos métodos para el estudio del significado biológico de la heterogeneidad estructural de la Prl y de obtener las diferentes variantes moleculares de la Prl con un alto grado de pureza, que permitan establecer nuevos métodos cuantitativos, útiles para ser aplicados en estudios clínicos y bioquímicos(AU)

ABSTRACT

Different techniques were used to determine the biochemical characteristics of the Prolactin (Prl) preparations of hypophyseal origin with preparations that are used in research centers for the development of in vitro and in vivo systems, bioanalyses, radioimmunoanalyses and immunoenzimatic analyses. The preparations were analyzed by electrophoresis under reducing conditions (SDS-PAGE), electrotrasnference and immunodetection, isoelectric focussing, high pressure liquid chromatography (HPLC) and binding capacity to microsomal receptors (RRA). It was observed that in the porcine Prl (pPrl), ovine Prl (oPrl) and human Prl (hPrl) there are significant proportions of the glycosilated form (30-40%) that are not found in the bovine Prl (bPrl) and in the rat Prl (rPrl). It was proved that it is possible to detect impurities or mixtures of the different molecular forms of Prl that appear in these hypophyseal preparations by using HPLC. The analysis by isoelectric focussing of the hypophyseal prolactins of different species revealed that in the bPrl there are 4 isoforms of electric charge, that the oPrl and the hPrl are composed of 3 isoforms, whereas the rPrl and the pPrl have 1 and 2 isoforms, respectively. The physiological meaning of the isoforms of electric charge in the hypophyseal Prl of different species is still unknown. According to the results obtained from the displacement curves and from the Scatchard graphs, it was found that there are differences among the dissociation constants (Kd) and the binding capacity of prolactins to microsomal receptors. Finally, it is necessary to know with more precision the biochemical, immunological and biological properties of the preparations of prolactins that are used in different studies, both in vivo and in vitro, since that's where the biological functions of the hormone are. The structural heterogeneity of the Prl was confirmed and widened in different species of mammals giving rise to the existence of different molecular variants of the hormone and to the diversity of functions it performs. The need to develop new methods for studying the biological meaning of the structural heterogeneity of Prl and to obtain different molecular variants of Prl with a degree of purity that allow to establish new quantitative methods useful to be applied in clinical and biochemical studies was proved. The adequate understanding of the structural modifications of prolactins and of their biological consequences will make possible to establish the synthesis and secretion mechanisms of this hormone, including its multifunctional properties(AU)