Métodos de extraçäo de DNA para a detecçäo de Salmonella em ovos de galinhas, com e sem casca, através da reaçäo em cadeia pela polimerase / DNA extraction methods for Salmonella detection in chicken eggs, inshel and outshel, by polimerase chain reaction

RESUMO

O diagnóstico microbiológico de Salmonella sp em amostras de alimentos é demorado, com cinco diferentes etapas, levando cerca de 120 horas até o resultado final. A utilizaçäo da técnica da Reaçäo em Cadeia pela Polimerase (PCR) pode diminuir esse período, porém sofre influência de substâncias presentes na amostra que afetam a reaçäo. O objetivo deste trabalho foi comparar dois métodos de extraçäo de DNA, a extraçäo por tratamento térmico e a pelo fenol-clorofórmio, em amostras de 100 ovos de galinhas domésticas artificialmente contaminados com uma cepa de Salmonella enterica sorovar typhimurium em fase estacionária. O material obtido com as extraçöes foi submetido à PCR, utilizando-se um par de iniciadores que amplificam um fragmento de 284pb do gene InvA de Salmonella sp. Comparando os métodos de extraçäo, observou-se uma diferença na capacidade de detecçäo de 12 por cento a favor do método do fenol-clorofórnio, quando a extraçäo foi realizada a partir do ovo com casca. No momento em que a mesma metodologia foi usada apenas com a parte interna dos ovos, essa diferença subiu para 26 por cento o que foi significativo (P<0,003), demonstrando que a metologia de extraçäo foi determinante para melhorar a sensibilidade da técnica. No entanto, ao comparar-se a percentagem de positivos independente da técnica de extraçäo do DNA, observou-se diferença significativa (P<0,047) a favor das amostras de ovos sem casca. Isso sugere que para a detecçäo de Salmonella por PCR deve-se utilizar apenas a parte interna dos ovos, pois a casca pode determinar interferência na técnica.