Obtención y purificación de fragmentos de un anticuerpo monoclonal contra el antígeno carcinoembrionario, IOR-CEA / Preparation and purification of fragments of monoclonal antibodies over carcinoembrionic antigen, IOR-CEA

RESUMEN

La idea de utilizar los anticuerpos monoclonales (AcMs) como portadores de otras moléculas tóxicas a las células neoplásicas, para provocar la muerte celular de forma específica ha sido utilizada por diversos grupos de investigación. Se han utilizado anticuerpos monoclonales para el diagnóstico de neoplasias malignas y sus metástasis, fundamentalmente en el campo de la medicina nuclear, mediante técnicas de inmunogammagrafía. Sin embargo, en algunos casos resulta más ventajoso la utilización de los fragmentos de los anticuerpos monoclonales ya que, debido a su tamaño molecular presentan mayor aclaramiento del torrente sanguíneo con mayor acumulación en el tejido blanco y menor probabilidad de formación de inmunocomplejos. El objetivo del presente artículo consiste en la obtención de fragmentos Fab y F (ab')2 a partir del anticuerpo monoclonal IOR-CEA, generado contra el antígeno carcinoembrionario. La obtención de los fragmentos Fab y F (ab')2 se realizó mediante digestión enzimática con papaína y pepsina, respectivamente. Se utilizaron las enzimas acopladas a una matriz de AH-Serapharosa para facilitar la separación de las mismas de la mezcla al concluir la reacción. Los resultados fueron satisfactorios con respecto a la obtención del fragmento Fab, no siendo así para los fragmentos F (ab')2, debido a que la pepsina, una vez acoplada a la matriz, perdió su actividad enzimática. Una vez establecidas las condiciones de reacción se obtuvieron los fragmentos Fab y se purificaron mediante una cromatografía de afinidad utilizando una matriz de proteínas A-Sepharosa, con un rendimiento de un 85 por ciento y manteniéndose su actividad biológica, lo cual fue ensayado utilizando técnicas de ELISA e inmunohistoquímica en cortes de tejido. El marcaje con 99mTc fue efectivo manteniéndose la actividad biológica de los fragmentos Fab, lo que los hace ser buenos candidatos para su utilización en la detección de tumores colorrectales y sus met stasis mediante inmunogammagrafía.