Purificación parcial y empleo de fracciones glicosídicas de Trypanosoma cruzi en el diagnóstico de la enfermedad de Chagas / Partial purification and use of Trypanosoma cruzi glycosidic fractions for Chagas disease diagnosis

RESUMEN

En el diagnóstico serológico de la enfermedad de Chagas se emplean fracciones proteicas y glicoproteicas de Trypanosoma cruzi, las cuales se degradan por la acción de proteasas endógenas del parásito, esto amerita el uso de inhibidores para su conservación encareciendo el costo del antígeno. La posibilidad de utilizar fracciones glicosídicas del parásito, resistentes a la acción de proteasas resolvería el problema, permitiendo obtener antígenos estables, de alta sensibilidad y a bajo costo. Esta alternativa se ve reforzada por la existencia en sueros de pacientes chagásicos de anticuerpos anti-galactosil dirigidas contra fracciones oligosacáridas de T. cruzi. El objetivo de este trabajo fue obtener fracciones glicosídicas de T. cruzi y evaluar su utilidad en el diagnóstico serológico de la enfermedad de Chagas. Se emplearon masas de parásitos de los cuatro estadios de T. cruzi, a partir de las cuales se obtuvieron proteínas y glicoproteínas totales, así como fracciones glicosídicas, éstas últimas mediante proteólisis exhaustiva con Proteinasa K. Se analizaron las fracciones proteicas, glicoproteicas y glicosídicas mediante SDS-PAGE y tinción específica para proteínas (Coomassie/Plata), así como para glico-proteínas y fracciones glicosídicas (APABGP). Se determinó la naturaleza antigénica de las diferentes fracciones mediante Western Blot y luminografía, utilizando suero control hiperinmune anti-epimastigota y "pool" de sueros chagásicos humanos. Finalmente se estudió, mediante ELISA, la capacidad discriminativa de las fracciones glicosídicas de los diferentes estadios para sueros de pacientes chagásicos y no chagásicos y la sensibilidad de las fracciones respecto al suero control. Se evidencia que a) existen polipéptidos, glicopéptidos y fracciones glicosídicas comunes y específicos de estadio; b) los epimastigotas y metacíclicos son más ricos en glicoproteínas antigénicas respecto a los tripomastigotas y amastigotas; c) existe una relación entre el patrón de fracciones glicosídicas y el tipo de hospedador; d) las fracciones glicosídicas sirven como antígenos para discriminar mediante ELISA pacientes chagásicos y no chagásicos, pero muestran títulos menores que los antígenos proteicos y glicoproteicos totales. Se concluye que es posible desarrollar un kit diagnóstico para...